磷是參與植物生理及生長(zhǎng)過(guò)程中重要的營(yíng)養(yǎng)元素,但磷在土壤中的可移動(dòng)性差,因吸附作用很難被吸收利用,因此增強(qiáng)作物對(duì)磷素吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)的能力,提高對(duì)磷素的吸收效率,已成為大豆育種工作的研究重點(diǎn)。本研究以大豆密碼子的使用偏好性為依據(jù),對(duì)無(wú)花果曲霉植酸酶phy A基因進(jìn)行密碼子優(yōu)化,人工合成了適合在大豆中表達(dá)的phyA（b）基因。以pCAMBIA3301為骨架,構(gòu)建由大豆凝集素基因啟動(dòng)子和信號(hào)肽序列調(diào)控的植物表達(dá)載體pCBPS-phyA（b）。用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法遺傳轉(zhuǎn)化吉林35,經(jīng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction,PCR）檢測(cè)、bar試紙條檢測(cè)、除草劑葉片涂抹檢測(cè)及半定量PCR（Reverse-Transcription PCR,RT-PCR）分析,結(jié)果表明目的基因整合至大豆基因組中并可以正常表達(dá)。依據(jù)RT-PCR結(jié)果,選取外源基因表達(dá)量最高的T₃代的株系,進(jìn)行磷性狀的相關(guān)分析,結(jié)果表明,phyA（b）超表達(dá)株系在植酸酶活性、植酸磷含量、無(wú)機(jī)磷含量方面均優(yōu)于phyA超表達(dá)株系以及野生型對(duì)照。由上述結(jié)果可知,phyA（b）基因比未改造的phyA基因在大...

【文章頁(yè)數(shù)】：87 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

pCBPS-phyA和pCBPS-phyA(b)，篩選標(biāo)記為草胺膦乙酰轉(zhuǎn)移酶基因(Phosphinothricinacetyltransferase，bar)如圖2-1所示。圖2-1克隆載體pMD19-Le3PS和植物表達(dá)載體pCBP....

豆密碼子使用頻率（黑色）和無(wú)花果曲霉phyA基因密碼子使用頻Comparisonofcodonusagefrequencyofsoybean(black)andthatofphAspergillusficuum(red)基因進(jìn)行了重新設(shè)計(jì)，密碼子自....

圖2-3菌落PCR檢測(cè)DH5α陽(yáng)性克隆3DetectionofDH5αreactionpositivecloneswithcolonyPCR的轉(zhuǎn)pCBPS-phyA單菌落；d-e：為挑選的轉(zhuǎn)pCBPS-phyA(b)單+：陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒；-：陰性....

圖2-4菌落PCR檢測(cè)C58陽(yáng)性克隆ig.2-4DetectionofC58reactionpositivecloneswithcolonyPCR-e：為挑選的單菌落，+：陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒，-：陰性對(duì)照H2O。

本文編號(hào)：4009507