丹參Salvia miltiorrhiza Bunge,為唇形科鼠尾草屬(Lamiaceae Salvia Linn)多年生草本植物,常以其干燥的根或根莖入藥�，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn),丹參在心腦血管疾病治療中具有重要作用,并廣泛應(yīng)用于此類疾病的臨床治療。然而,丹參中的主要生物活性成分含量較低,長期以來,國內(nèi)對野生丹參的大肆采挖和粗放的大田種植模式,致使良品丹參日漸稀少,丹參中藥材質(zhì)量、產(chǎn)量都面臨重大考驗。因此,運用基因工程技術(shù)手段改良丹參品質(zhì)日漸受到關(guān)注。目前,丹參基因組和轉(zhuǎn)錄組的研究工作的不斷深入,對丹參中主要活性成分丹參酮和丹參酚酸的生物合成代謝途徑的認識也逐漸明確。其中,丹參酮合成代謝上游合成代謝的兩條代謝通路——MVA途徑和MEP途徑以及相關(guān)代謝關(guān)鍵酶基因均已被挖掘;應(yīng)用基因工程技術(shù)手段調(diào)控丹參酮生物合成途徑并獲得高產(chǎn)丹參酮材料的的條件日趨成熟。本研究根據(jù)丹參酮代謝關(guān)鍵酶基因序列信息,設(shè)計目標位點特異性擴增引物,分離并擴增丹參SmCPS、SmKSL、SmGPPS、SmFPPS等丹參酮合成代謝調(diào)控基因元件。針對SmCPS、SmKSL基因,應(yīng)用基因疊加技術(shù)構(gòu)建SmCPS、SmKSL多基因...

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 丹參基礎(chǔ)研究概述
    1.2 基因工程技術(shù)在丹參代謝工程中的應(yīng)用
        1.2.1 丹參毛狀根的研究
        1.2.2 丹參次生代謝研究進展
        1.2.3 多基因共表達策略的研究進展
        1.2.4 MIGS技術(shù)在基因調(diào)控中的應(yīng)用
    1.3 研究目標及意義
    1.4 研究內(nèi)容和技術(shù)路線
第二章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株及質(zhì)粒
    2.2 實驗試劑
    2.3 實驗儀器
    2.4 實驗方法
        2.4.1 培養(yǎng)基配制與處理
        2.4.2 藥品與標準品配制
        2.4.3 感受態(tài)制備
        2.4.4 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化
        2.4.5 核酸回收與質(zhì)粒提取
        2.4.6 丹參gDNA、cDNA獲取
        2.4.7 載體構(gòu)建
        2.4.8 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的丹參毛狀根遺傳轉(zhuǎn)化
        2.4.9 丹參毛狀根陽性轉(zhuǎn)化子PCR鑒定
        2.4.10 GUS組織化學(xué)染色
        2.4.11 丹參毛狀根培養(yǎng)
        2.4.12 丹參酮回流提取
        2.4.13 HPLC丹參酮含量檢測
第三章 結(jié)果分析與討論
    3.1 丹參Sm CPS與SmKSL基因的功能分析
        3.1.1 SmCPS與SmKSL cDNA克隆與序列分析
        3.1.2 SmCPS與SmKSL共表達載體構(gòu)建
        3.1.3 轉(zhuǎn)基因丹參毛狀根的獲得與檢測
    3.2 丹參SmGPPS與SmFPPS基因功能分析
        3.2.1 SmGPPS與SmFPPS cDNA克隆與序列分析
        3.2.2 SmGPPS與SmFPPS基因過表達及抑制表達載體構(gòu)建
        3.2.3 轉(zhuǎn)基因陽性毛狀根的獲得與檢測
        3.2.4 不同轉(zhuǎn)基因根系中SmGPPS與SmFPPS基因表達分析
        3.2.5 丹參SmGPPS與SmFPPS基因轉(zhuǎn)基因毛狀根的擴大培養(yǎng)
        3.2.6 丹參SmGPPS與SmFPPS基因轉(zhuǎn)基因毛狀根中次生代謝產(chǎn)物含量的測定
    3.3 討論
第四章 總結(jié)與展望
    4.1 全文總結(jié)
    4.2 展望
附表
    附表1 引物序列統(tǒng)計
    附表2 中英縮略詞對照表
致謝
參考文獻
攻讀碩士學(xué)位期間取得的成果



本文編號：3950677