標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)被廣泛用于轉(zhuǎn)基因作物檢測(cè)中,轉(zhuǎn)基因標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制對(duì)于檢測(cè)方法建立和檢測(cè)設(shè)備開(kāi)發(fā)至關(guān)重要。本研究針對(duì)我國(guó)研發(fā)的轉(zhuǎn)基因水稻轉(zhuǎn)化體,分別構(gòu)建了四個(gè)單靶標(biāo)質(zhì)粒DNA標(biāo)準(zhǔn)分子和一個(gè)多靶標(biāo)質(zhì)粒DNA標(biāo)準(zhǔn)分子。對(duì)構(gòu)建的質(zhì)粒DNA分子進(jìn)行了適應(yīng)性、均勻性和穩(wěn)定性分析,并利用微滴數(shù)字PCR(dd PCR)方法進(jìn)行了特性量值評(píng)估。本文第一部分分別針對(duì)轉(zhuǎn)基因水稻PA110-15、G281、G6H1和4114-7-2,構(gòu)建了四個(gè)新型的單靶標(biāo)質(zhì)粒分子pPA110-15、pG281、pG6H1和p4114-7-2。這四個(gè)分子均含有一段長(zhǎng)為279 bp的水稻內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因SPS片段和轉(zhuǎn)化體特異性序列,且這兩個(gè)片段之間插入了一段長(zhǎng)為2463 bp的水稻基因組間隔片段。質(zhì)粒分子的適應(yīng)性分析結(jié)果顯示以pPA110-15、pG6H1和pG281作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在定量PCR體系中構(gòu)建的內(nèi)外源標(biāo)準(zhǔn)曲線均具有理想的線性相關(guān)系數(shù)(0.9994-1.0000)和良好的擴(kuò)增效率(96%-98%)。各標(biāo)準(zhǔn)曲線重復(fù)性的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.09%至2.12%,重演性的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.10%至1.25%。各靶標(biāo)的最低檢測(cè)下限(LOD)均為5 c...

【文章頁(yè)數(shù)】：96 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-11996年-2015年全球范圍內(nèi)轉(zhuǎn)基因作物種植情況

圖1-11996年-2015年全球范圍內(nèi)轉(zhuǎn)基因作物種植情況[3]Figure1-1Globalareaoftransgeniccropsduring1996-2015[3]據(jù)統(tǒng)計(jì)，2015年全球共有11個(gè)國(guó)家的轉(zhuǎn)基因作物種植面積超過(guò)100萬(wàn)公頃（表1....

圖1-2四種轉(zhuǎn)基因成分檢測(cè)策略的比較

品系特異性PCR的特異性最高，應(yīng)用最為廣泛。根據(jù)檢測(cè)原理的不同，PCR檢測(cè)方法主要有定性PCR、定量PCR和數(shù)字PCR等。圖1-2四種轉(zhuǎn)基因成分檢測(cè)策略的比較Figure1-2FourtypesofPCR-basedGMcompositionde....

圖1-3定量PCR的實(shí)時(shí)擴(kuò)增圖與標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立Figure1-3Real-timeamplificationplotandstandardcurveoffluorescentquantitativePCR

等人將熒光探針?lè)ㄓ糜跈z測(cè)三種轉(zhuǎn)基因大豆RRS、A2704-12和MON89788，并建立了一種新型的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法。圖1-3定量PCR的實(shí)時(shí)擴(kuò)增圖與標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立Figure1-3Real-timeamplificationplotandstan....

圖1-4微滴數(shù)字PCR原理示意圖

32]。圖1-4微滴數(shù)字PCR原理示意圖[32]Figure1-4PrincipleofdigitalPCR,（a）經(jīng)過(guò)稀釋的目標(biāo)DNA樣品，（b）樣品被分散到各個(gè)微小的反應(yīng)單元，（c）PCR擴(kuò)增反應(yīng)，（d）檢測(cè)熒光信號(hào)計(jì)數(shù)數(shù)字PCR可以達(dá)到在數(shù)萬(wàn)個(gè)PCR反應(yīng)....

本文編號(hào)：3946134