標準物質被廣泛用于轉基因作物檢測中,轉基因標準物質研制對于檢測方法建立和檢測設備開發(fā)至關重要。本研究針對我國研發(fā)的轉基因水稻轉化體,分別構建了四個單靶標質粒DNA標準分子和一個多靶標質粒DNA標準分子。對構建的質粒DNA分子進行了適應性、均勻性和穩(wěn)定性分析,并利用微滴數字PCR(dd PCR)方法進行了特性量值評估。本文第一部分分別針對轉基因水稻PA110-15、G281、G6H1和4114-7-2,構建了四個新型的單靶標質粒分子pPA110-15、pG281、pG6H1和p4114-7-2。這四個分子均含有一段長為279 bp的水稻內標準基因SPS片段和轉化體特異性序列,且這兩個片段之間插入了一段長為2463 bp的水稻基因組間隔片段。質粒分子的適應性分析結果顯示以pPA110-15、pG6H1和pG281作為標準物質在定量PCR體系中構建的內外源標準曲線均具有理想的線性相關系數(0.9994-1.0000)和良好的擴增效率(96%-98%)。各標準曲線重復性的相對標準偏差為0.09%至2.12%,重演性的相對標準偏差為0.10%至1.25%。各靶標的最低檢測下限(LOD)均為5 c...

【文章頁數】：96 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-11996年-2015年全球范圍內轉基因作物種植情況

圖1-11996年-2015年全球范圍內轉基因作物種植情況[3]Figure1-1Globalareaoftransgeniccropsduring1996-2015[3]據統(tǒng)計，2015年全球共有11個國家的轉基因作物種植面積超過100萬公頃（表1....

圖1-2四種轉基因成分檢測策略的比較

品系特異性PCR的特異性最高，應用最為廣泛。根據檢測原理的不同，PCR檢測方法主要有定性PCR、定量PCR和數字PCR等。圖1-2四種轉基因成分檢測策略的比較Figure1-2FourtypesofPCR-basedGMcompositionde....

圖1-3定量PCR的實時擴增圖與標準曲線的建立Figure1-3Real-timeamplificationplotandstandardcurveoffluorescentquantitativePCR

等人將熒光探針法用于檢測三種轉基因大豆RRS、A2704-12和MON89788，并建立了一種新型的實時熒光定量PCR檢測方法。圖1-3定量PCR的實時擴增圖與標準曲線的建立Figure1-3Real-timeamplificationplotandstan....

圖1-4微滴數字PCR原理示意圖

32]。圖1-4微滴數字PCR原理示意圖[32]Figure1-4PrincipleofdigitalPCR,（a）經過稀釋的目標DNA樣品，（b）樣品被分散到各個微小的反應單元，（c）PCR擴增反應，（d）檢測熒光信號計數數字PCR可以達到在數萬個PCR反應....

本文編號：3946134