為了探究小麥(Triticum aestivum L.)WRKY基因的功能,采用同源克隆的方法,從小麥品種‘科農(nóng)199’中克隆得到2個WRKY基因,分別命名為TaWRKYⅢ-A37和TaWRKYⅡc-D2,并對其進行生物信息學分析和不同逆境脅迫下的表達分析。生物信息學分析顯示,TaWRKYⅢ-A37和TaWRKYⅡc-D2基因都含有2個內(nèi)含子和3個外顯子,分別編碼206和138個氨基酸,編碼蛋白都屬于親水性不穩(wěn)定非分泌型的核蛋白。系統(tǒng)進化分析表明,TaWRKYⅢ-A37蛋白與其兩個同源拷貝的親緣關系最近,而TaWRKYⅡc-D2蛋白與粗山羊草親緣關系最近。qRT-PCR結果表明,TaWRKYⅢ-A37和TaWRKYⅡc-D2基因在小麥根、莖和葉中均有表達,前者在根中表達量最高,后者在葉中表達量最高,二者均在莖中低表達;在苗期TaWRKYⅢ-A37基因受到PEG、H₂O₂和ABA脅迫后表達上調(diào),NaCl處理后4～8 h內(nèi)表達下調(diào)且低于對照表達水平,而且在灌漿期受到PEG、NaCl、H₂O₂和ABA脅迫...

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圖1小麥TaWRKYⅢ-A37和TaWRKYⅡc-D2

利用DNAMAN8.0對2條氨基酸序列比對分析后發(fā)現(xiàn)TaWRKYⅢ-A37基因含有一個位于第39～45個氨基酸之間的WRKYGEK保守結構域和位于第58～93個氨基酸之間C2HC型的鋅指結構,屬于第Ⅲ類WRKY基因家族。TaWRKYⅡc-D2基因含有一個位于第51～57個氨基酸之....

圖2TaWRKYⅢ-A37和TaWRKYⅡc-D2蛋白親/

為了探究TaWRKYⅢ-A37和TaWRKYⅡc-D2基因的表達與調(diào)控,通過PlantCARE網(wǎng)站分析了2個基因啟動子區(qū)的順式作用元件。如圖5所示,2個基因均有34種順式作用元件,其中參與光響應的順式作用元件種類最多,各有5種,Box4和G-box是2個基因共有的光響應順式作....

圖3TaWRKYⅢ-A37和TaWRKYⅡc-D2蛋白磷酸化位點預測

將TaWRKYⅢ-A37和TaWRKYⅡc-D2氨基酸序列提交到NCBI-Blast中比對,發(fā)現(xiàn)2條氨基酸序列與葡萄(Vitisvinifera)、糜子(Panicummiliaceum)和彎葉畫眉草(Eragrostiscurvula)等的氨基酸序列相似性較高,下載這13....

圖4TaWRKYⅢ-A37和TaWRKYⅡc-D2蛋白二級結構預測

圖3TaWRKYⅢ-A37和TaWRKYⅡc-D2蛋白磷酸化位點預測圖5TaWRKYⅢ-A37和TaWRKYⅡc-D2基因啟動子區(qū)的順式作用元件

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