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籽粒莧AhPPDK原核表達(dá)及AhPEPC啟動(dòng)子遺傳轉(zhuǎn)化研究

發(fā)布時(shí)間:2024-03-16 00:25
  籽粒莧是重要的C4經(jīng)濟(jì)作物。本文利用相關(guān)性分析和通徑系數(shù)分析研究了影響籽粒莧凈光合速率的相關(guān)因素;對(duì)本課題組克隆的籽粒莧PPDK基因(AhPPDK)(GenBank注冊(cè)號(hào):JF907701)進(jìn)行了原核表達(dá),獲得了原核重組蛋白,測(cè)定了酶活性;利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化方法將不同缺失長(zhǎng)度的AhPEPC啟動(dòng)子轉(zhuǎn)入煙草和馬鈴薯中,以驗(yàn)證其功能。研究結(jié)果如下:(1)籽粒莧凈光合速率Pn和溫度Tm、光合有效輻射PAR、蒸騰速率Tr、葉片氣孔導(dǎo)度Cleaf、胞間CO2濃度CO2int相關(guān)分析表明,Tm、PAR、Tr與Pn呈正相關(guān),且相關(guān)關(guān)系都達(dá)到極顯著水平,Cleaf、CO2int與Pn呈負(fù)相關(guān),且相關(guān)關(guān)系也達(dá)到極顯著水平;各個(gè)因素之間的相關(guān)分析表明,除E和Cleaf呈顯著相關(guān)外,其他各因素之間都達(dá)到極顯著相關(guān)水平。對(duì)上述相關(guān)因素做通徑分析,結(jié)果表明,PAR、Tr和Cleaf與Pn的通徑系數(shù)為正值,Tm和CO2int與Pn的通徑系數(shù)為負(fù)值,上述5個(gè)因素對(duì)凈光合速率Pn的相對(duì)重要性依次為:PAR(0.339)>Tr(0.299)>Cleaf(0.251)>Tm(-0.522)>CO2i...

【文章頁(yè)數(shù)】:65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【部分圖文】:

圖3.1PCR擴(kuò)增AhPPDK目的基因M:DL5000DNAMarker;1,2:PCR擴(kuò)增產(chǎn)物

圖3.1PCR擴(kuò)增AhPPDK目的基因M:DL5000DNAMarker;1,2:PCR擴(kuò)增產(chǎn)物

析及原核表達(dá)載體構(gòu)建體pUC-AhPPDK為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,克隆Ah膠電泳,可見大約3kb的片段(如圖3.1)。將該片段回收,構(gòu)建形成重組質(zhì)粒pEASY-E1-AhPPDK,對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)baⅠ和SacⅠ分別單酶切檢測(cè)(如圖3.2),


圖3.2重組原核表達(dá)載體pEASY-E1-AhPPDK的酶切檢測(cè)M:DL5000DNAMarker;1-3:SacⅠ、XbaⅠ、EcoRⅠ分別單酶切

圖3.2重組原核表達(dá)載體pEASY-E1-AhPPDK的酶切檢測(cè)M:DL5000DNAMarker;1-3:SacⅠ、XbaⅠ、EcoRⅠ分別單酶切

3.2重組原核表達(dá)載體pEASY-E1-AhPPDK的酶切檢測(cè)000DNAMarker;1-3:SacⅠ、XbaⅠ、EcoRⅠ分別單SY-E1-AhPPDK上,AhPPDK序列上游為6-His測(cè)序結(jié)果表明,6-His-AhPPDK不會(huì)出現(xiàn)移碼原核表達(dá)載體構(gòu)建正確....


圖3.4SDS-PAGE電泳分析pEASY-E1-AhPPDK的表達(dá)情況

圖3.4SDS-PAGE電泳分析pEASY-E1-AhPPDK的表達(dá)情況

圖3.4SDS-PAGE電泳分析pEASY-E1-AhPPDK的表達(dá)情況M:蛋白marker44.3-200KDa;1、2、3分別為AhPPDK基因經(jīng)IPTG誘導(dǎo)6h、4:AhPPDK基因未誘導(dǎo)圖3.5SDS-PAGE電泳分析pEASY-E1....


圖3.5SDS-PAGE電泳分析pEASY-E1-AhPPDK誘導(dǎo)6h的沉淀和上清表達(dá)情況

圖3.5SDS-PAGE電泳分析pEASY-E1-AhPPDK誘導(dǎo)6h的沉淀和上清表達(dá)情況

.5SDS-PAGE電泳分析pEASY-E1-AhPPDK誘導(dǎo)6h的沉marker44.3-200KDa;1、2分別為pEASY-E1-AhPPDK誘酶液磷酸雙激酶的酶活測(cè)定表達(dá)的大腸桿菌的菌液超聲波破碎,收集上清和沉PPDK酶的活性,如表3.2所示,結(jié)....



本文編號(hào):3928837

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