玉米(Zea mays L.)是重要的糧食、飼料和經(jīng)濟(jì)作物,在我國(guó)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中扮演著不可或缺的角色。干旱和鹽長(zhǎng)久以來(lái)都是嚴(yán)重影響玉米產(chǎn)量的非生物脅迫因素,培育具有抗旱、耐鹽功能的玉米至今仍是增加玉米產(chǎn)量的重要目標(biāo)。質(zhì)膜內(nèi)在蛋白(Plasma membrane Intrinsic Proteins,PIPs)廣泛存在于植物細(xì)胞膜系統(tǒng)中,在植物體內(nèi)的水分運(yùn)輸和脅迫響應(yīng)過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用。本文已經(jīng)對(duì)ZmPIP2;6在植物水分脅迫耐受性方面的功能分析進(jìn)行了研究。研究結(jié)果如下:1)對(duì)ZmPIP2;6做了氨基酸序列分析和蛋白結(jié)構(gòu)分析。與其他參與水分脅迫耐受性的PIPs相比,ZmPIP2;6具有相同的保守結(jié)構(gòu)域和保守序列。2)構(gòu)建ZmPIP2;6-GFP融合載體,通過(guò)從玉米幼苗葉片中分離出來(lái)的原生質(zhì)體對(duì)ZmPIP2;6進(jìn)行亞細(xì)胞定位,結(jié)果顯示ZmPIP2;6定位于細(xì)胞質(zhì)膜。3)表達(dá)模式分析結(jié)果顯示,ZmPIP2;6在玉米雄穗中表達(dá)量最高,胚乳中表達(dá)量最低。用PEG或者NaCl處理玉米,可以誘導(dǎo)其根和葉片中ZmPIP2;6在水分脅迫下的表達(dá)。4)在滲透、干旱和鹽脅迫條件下,ZmPIP2;6超表達(dá)轉(zhuǎn)...

【文章頁(yè)數(shù)】：79 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 植物水通道蛋白
        1.1.1 植物水通道蛋白的分類(lèi)
        1.1.2 植物水通道蛋白的結(jié)構(gòu)
        1.1.3 植物水通道蛋白的功能
        1.1.4 植物水通道蛋白的研究方法
    1.2 植物的抗逆機(jī)制
        1.2.1 植物的抗旱機(jī)制
        1.2.2 植物的耐鹽機(jī)制
    1.3 轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展與應(yīng)用
        1.3.1 轉(zhuǎn)基因技術(shù)在植物中的應(yīng)用
        1.3.2 轉(zhuǎn)基因玉米研究進(jìn)展
        1.3.3 轉(zhuǎn)基因玉米在我國(guó)的發(fā)展現(xiàn)狀
2 引言
    2.1 研究目的與意義
    2.2 研究?jī)?nèi)容
    2.3 技術(shù)路線
3 材料與方法
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)植株及載體材料
        3.1.2 培養(yǎng)條件
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑與耗材
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備
        3.1.5 常用實(shí)驗(yàn)試劑配方
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 玉米PIPs基因的分析與篩選
        3.2.2 植物總RNA的快速提取
        3.2.3 RNA的反轉(zhuǎn)錄
        3.2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        3.2.5 植物DNA的提取(CTAB法)
        3.2.6 基因克隆
        3.2.7 引物設(shè)計(jì)
        3.2.8 載體構(gòu)建
        3.2.9 大腸桿菌感受態(tài)DH5α的制備(要求無(wú)菌操作)
        3.2.10 農(nóng)桿菌感受態(tài)EHA105的制備(要求無(wú)菌操作)
        3.2.11 目的基因的表達(dá)分析
        3.2.12 擬南芥的遺傳轉(zhuǎn)化
        3.2.13 轉(zhuǎn)基因擬南芥的表型測(cè)定
        3.2.14 總蛋白提取及Western Blot檢測(cè)
        3.2.15 玉米原生質(zhì)體的提取及轉(zhuǎn)化(PEG介導(dǎo)法)
        3.2.16 亞細(xì)胞定位
        3.2.17 雙分子熒光互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)
        3.2.18 玉米遺傳轉(zhuǎn)化(農(nóng)桿菌介導(dǎo)法)
        3.2.19 轉(zhuǎn)基因玉米陽(yáng)性株鑒定
4 結(jié)果與分析
    4.1 ZmPIP2;6的氨基酸序列分析
    4.2 ZmPIP2;6基因的克隆分析及載體構(gòu)建
    4.3 ZmPIP2;6的亞細(xì)胞定位
    4.4 ZmPIP2;6的表達(dá)分析
    4.5 ZmPIP2;6超表達(dá)轉(zhuǎn)基因擬南芥獲得及鑒定
    4.6 ZmPIP2;6超表達(dá)轉(zhuǎn)基因擬南芥在脅迫環(huán)境下的表型分析
    4.7 ZmPIP2;6轉(zhuǎn)基因擬南芥脅迫響應(yīng)基因的表達(dá)分析
    4.8 ZmPIP2;6轉(zhuǎn)化玉米及轉(zhuǎn)基因植株鑒定
    4.9 ZmPIP2;6的熒光互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)
5 討論
6 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
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本文編號(hào)：3914766