基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrix metalloproteinases,MMPs)是一類高度保守的鋅鈣依賴型的內(nèi)肽酶家族。在植物生長發(fā)育以及應(yīng)答生物和非生物脅迫過程中具有重要的作用。大豆[Glycine max(L.)Merr.]是世界上重要的油料作物,在我國種植業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整中發(fā)揮重要作用。我國南方春大豆種子生理成熟期往往會遇到高溫多雨的夏季,導(dǎo)致種子發(fā)生田間劣變,嚴(yán)重影響了春大豆的產(chǎn)量和品質(zhì)。本課題組前期的差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究結(jié)果表明高溫高濕(40℃/100%RH)脅迫后Gm1-MMP蛋白在抗田間劣變品種中與對照相比顯著上調(diào)表達(dá),表明Gm1-MMP可能響應(yīng)高溫高濕脅迫從而參與春大豆種子田間劣變抗性。為進(jìn)一步研究大豆MMPs在響應(yīng)高溫高濕脅迫中的功能,本研究擬選用Gm1-MMP和Gm2-MMP兩個基因作為研究對象,以種子田間劣變抗性品種湘豆3號和不抗品種寧鎮(zhèn)1號為材料,在此基礎(chǔ)上開展以下研究:(1)大豆Gm1-MMP和Gm2-MMP的分離、生物信息學(xué)分析及其編碼蛋白的亞細(xì)胞定位;(2)Gm1-MMP和Gm2-MMP基因在不同組織器官、種子發(fā)育過程以及高溫高濕(40℃/100%RH)脅迫下的表達(dá)...

【文章頁數(shù)】：157 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－２哺乳動物中ＭＭＰ－１催化區(qū)結(jié)構(gòu)示意圖（Ｂｏｒｋａｋｏｔｉ，２０００）??Ｆｉｇ．?１－２?Ｔｈｅ?ｃａｔａｌｙｔｉｃ?ｄｏｍａｉｎ?ｏｆ?ＭＭＰ－１?ｉｎ?ｍａｍｍａｌ?（Ｂｏｒｋａｋｏｔｉ，?２０００）??另外，與大多數(shù)哺乳動物中的ＭＭＰｓ不同的是，目前在高等植物中發(fā)現(xiàn)的所有??

類血紅素結(jié)合蛋白區(qū)（Ｃａｕｗｅ和Ｏｐｄｅｎａｋｋｅｒ，２０１０）。有時，ＭＭＰｓ在Ｃ末端還含介??跨膜結(jié)構(gòu)域或ＧＰＩ錨定位點(diǎn)。大多數(shù)動物ＭＭＰｓ保守結(jié)構(gòu)域中含有類血紅素結(jié)合蛋白??區(qū)，而植物ＭＭＰｓ沒有這一結(jié)構(gòu)，詳見圖１－１。??〇－［?１?ａ）?ｇｅｎｅｒａｌ?ｄｏｍａｉｎ?ｓ....

圖１－３技術(shù)路線??Ｆｉｇ．?１－３?Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ?ｒｏａｄｍａｐ??

?大豆基質(zhì)金屬蛋白酶基因Ｇｗ／－ＭＭＰ和Ｇｍ２－ＭＭＰ的分離以及響應(yīng)高溫高濕脅迫的功能分析???

圖２－１大豆葉片ＲＮＡ及Ｊｃ／／７？檢測結(jié)果??Ｍ：?ＤＬ２０００Ｍａｒｋｅｒ；?ｈ?寧鎮(zhèn)?１?號；２．？湘豆?３?號??

２．２大豆總ＤＮＡ的提取??采用ＣＴＡＢ法對大豆第一葉期的基因組ＤＮＡ進(jìn)行提取，經(jīng)１．５?％瓊脂糖凝膠電泳??檢測，結(jié)果顯示（圖２－２）：?ＤＮＡ降解很少，表明所提ＤＮＡ具有較好的質(zhì)量。??ＤＮＡ??Ｍ?１?２??５００?ｂｐ???２５０?ｂｐ??＿議議國??１００ｂｐ?—?ｐ』....

圖２－３?基因的ｃＤＮＡ和ＤＮＡ擴(kuò)增結(jié)果??Ｍ：?ＤＬ２０００Ｍａｒｋｅｒ；?１：寧鎮(zhèn)?１?號；２：湘豆?３?號??

以ＮＣＢＩ公布的Ｇｗ２－ＭＭＰ?ＣＤＳ序列為模板，使用Ｐｒｉｍｅｒ?Ｐｒｅｍｉｅｒ?５．０軟件設(shè)計的??引物分別對寧鎮(zhèn)１號及湘豆３號的ｃＤＮＡ進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)增，經(jīng)１．５?％瓊脂糖凝膠電泳檢??測，在１１６３?ｂｐ位置有淸楚的特異性條帶（圖２－４），與預(yù)期大小一致。把擴(kuò)增的產(chǎn)物回??....

本文編號：3908099