水稻作為單子葉模式植物,是少數(shù)實(shí)現(xiàn)成熟組織培養(yǎng)的作物之一,但是對其組織培養(yǎng)過程中的生理過程和具體分子機(jī)制仍然知之甚少。對擬南芥愈傷組織誘導(dǎo)的研究發(fā)現(xiàn),生長素通路中的IAA基因家族與ARF基因家族,以及被ARF轉(zhuǎn)錄因子激活轉(zhuǎn)錄的LBD基因家族這三者形成的調(diào)控機(jī)制,對愈傷組織的誘導(dǎo)起著重要的作用。本文的研究發(fā)現(xiàn),水稻中存在類似的調(diào)控機(jī)制,在水稻種子的愈傷組織誘導(dǎo)過程發(fā)揮著重要的作用。本研究通過構(gòu)建了水稻LBD基因家族的CRL1基因超表達(dá)與基因敲除載體,轉(zhuǎn)化中花11水稻愈傷,獲得5個(gè)轉(zhuǎn)基因超表達(dá)家系,8個(gè)轉(zhuǎn)基因敲除家系。通過對遺傳材料種子進(jìn)行愈傷誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)CRL1基因的超表達(dá)材料與對照組無明顯差異,但是CRL1基因敲除材料的愈傷組織誘導(dǎo)受到了強(qiáng)烈抑制,與已知的水稻Os IAA10的RNA干擾材料表型類似。為了研究這兩者的關(guān)系,研究首先進(jìn)行了亞細(xì)胞定位實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示Os IAA10同時(shí)定位在細(xì)胞核與細(xì)胞膜上,對酵母雙雜交篩庫實(shí)驗(yàn)得到的大量突變株進(jìn)行菌落PCR并測序后發(fā)現(xiàn),Os IAA10只能與Os ARF家族眾多成員中的Os ARF5,17,21,23四個(gè)轉(zhuǎn)錄因子發(fā)生互作。以CRL1基因啟...

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1生長素信號通路Fig1-1Theauxinsignalingpathway

水稻愈傷誘導(dǎo)過程中生長素通路的研究7圖1-1生長素信號通路Fig1-1Theauxinsignalingpathway生物信息學(xué)和分子生物學(xué)研究已經(jīng)重新標(biāo)記了許多Aux/IAA蛋白，現(xiàn)有資料顯示它們通常具有四個(gè)保守的特征域：域I，II，III和IV。域I已被鑒定為具有乙烯反應(yīng)因子....

圖3-1CRISPR載體結(jié)構(gòu)圖(a)與部分終載體酶切膠圖(b)，靶點(diǎn)位置示意圖（c）

水稻愈傷誘導(dǎo)過程中生長素通路的研究273.結(jié)果3.1基因敲除載體構(gòu)建使用MluⅠ酶切CRISPR-CRL1終載體質(zhì)粒，切下串聯(lián)的gRNA表達(dá)盒片段大小約為1300bp，如圖3-1所示，敲除靶點(diǎn)位于cDNA的前半部分。(a)(b)(c)圖3-1CRISPR載體結(jié)構(gòu)圖(a)與部分終載....

圖3-2核文庫篩選示意圖

華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2020屆碩士研究生畢業(yè)論文283.2超表達(dá)與酵母雙雜交載體構(gòu)建從水稻葉片總DNA中擴(kuò)增CRL1基因片段，選取載體上的酶切位點(diǎn)是BamHI和KpnI，基于無縫克隆構(gòu)建載體的方法，我們在目的片段5’和3’分別引入了酶切位點(diǎn)和載體的同源臂，利用重組酶將目的片段連接至線性化....

圖3-3部分轉(zhuǎn)基因植株陽性檢測結(jié)果

水稻愈傷誘導(dǎo)過程中生長素通路的研究293.3.基因轉(zhuǎn)化植株的陽性鑒定通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，將終載體轉(zhuǎn)化中花11水稻愈傷組織，獲得CRL1基因T1代轉(zhuǎn)基因水稻植株113株，對幼苗進(jìn)行取樣，抽提DNA后用潮霉素標(biāo)記基因引物進(jìn)行PCR陽性檢測，部分檢測結(jié)果如圖3-3所示。MC1陽陰C13C....

本文編號：3893902