生長素抑制蛋白基因(Auxin repressed protein gene,ARP)受到生長素(IAA)信號抑制表達(dá),在植物的生長、發(fā)育、抗病、抗逆以及種子休眠等過程中發(fā)揮重要的作用。但有關(guān)水稻生長素抑制基因OsARP1的研究,目前還沒見報(bào)道。本文采用基因過表達(dá)和CRISPR/Cas9基因敲除轉(zhuǎn)基因技術(shù),創(chuàng)建水稻OsARP1基因過表達(dá)及其啟動子和外顯子敲除轉(zhuǎn)基因植株,研究這些轉(zhuǎn)基因植株在種子萌發(fā)和幼苗生長等方面的差異,獲得了如下結(jié)果:1、獲得了OsARP1過量表達(dá)載體轉(zhuǎn)化再生植株191株,對其中60株進(jìn)行陽性檢測發(fā)現(xiàn)了轉(zhuǎn)基因陽性植株56株,陽性率為93.33%。采用qRT-PCR方法對56株T₀代轉(zhuǎn)基因陽性植株OsARP1基因的表達(dá)量進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)表達(dá)量高于野生型2倍以上的有27株,占陽性植株總數(shù)的48%。2、獲得了OsARP1啟動子敲除載體轉(zhuǎn)化再生植株112株,對其中47株進(jìn)行陽性檢測發(fā)現(xiàn)了轉(zhuǎn)基因陽性植株44株,陽性率為93.62%。對44株陽性植株靶點(diǎn)序列進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)31株靶點(diǎn)序列發(fā)生了變異,變異率為70.45%;在靶點(diǎn)1發(fā)生變異的植株28株,純合變異13...

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 前言
    1.1 生長素的研究進(jìn)展
        1.1.1 生長素的發(fā)現(xiàn)及其作用
        1.1.2 生長素合成與代謝相關(guān)基因的研究進(jìn)展
    1.2 植物生長素抑制蛋白基因的研究進(jìn)展
    1.3 基因編輯技術(shù)的研究進(jìn)展
    1.4 本研究的主要內(nèi)容,目的及意義
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與種植
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 材料種植與取樣
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 OsARP1 過表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.2 水稻OsARP1 基因的CRISPR/Cas9 敲除載體的構(gòu)建
        2.2.3 OsARP1 過表達(dá)載體及其敲除載體的遺傳轉(zhuǎn)化
        2.2.4 水稻基因組DNA的提取
        2.2.5 水稻總RNA的提取
        2.2.6 RNA的反轉(zhuǎn)錄
        2.2.7 轉(zhuǎn)基因陽性水稻植株的檢測
        2.2.8 轉(zhuǎn)基因敲除植株的測序分析
        2.2.9 qRT-PCR檢測轉(zhuǎn)基因植株的表達(dá)量
        2.2.10 轉(zhuǎn)基因水稻植株的生長表型分析
        2.2.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 OsARP1 基因過表達(dá)和敲除載體的構(gòu)建
        3.1.1 OsARP1 過表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.1.2 OsARP1 啟動子上敲除載體構(gòu)建
        3.1.3 OsARP1 外顯子上敲除載體的構(gòu)建
    3.2 T₀代OsARP1 轉(zhuǎn)基因植株的獲得
        3.2.1 T₀代OsARP1 過表達(dá)轉(zhuǎn)基因植株的獲得
        3.2.2 T₀代OsARP1 啟動子敲除轉(zhuǎn)基因植株的獲得
        3.2.3 T₀代OsARP1 外顯子敲除轉(zhuǎn)基因植株的獲得
    3.3 T₀代OsARP1 過表達(dá)和敲除轉(zhuǎn)基因植株的分子鑒定
        3.3.1 T₀代OsARP1 過表達(dá)植株的表達(dá)量分析
        3.3.2 OsARP1 啟動子敲除轉(zhuǎn)基因植株的分子鑒定
        3.3.3 OsARP1 外顯子敲除轉(zhuǎn)基因植株的分子鑒定
    3.4 OsARP1 轉(zhuǎn)基因植株的表型分析
        3.4.1 OsARP1 基因?qū)ΨN子萌發(fā)的影響
        3.4.2 OsARP1 基因?qū)τ酌缰旮哂绊?br>第四章 討論
    4.1 CRISPR-Cas技術(shù)是一種有效的基因編輯方法
    4.2 生長素抑制蛋白基因ARP的功能分析
    4.3 本研究的不足和展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄



本文編號：3846054