棉花是我國天然纖維的重要來源之一,同時也是作為鹽堿地改良的先鋒作物。從分子生物學水平開展棉花耐鹽機理的研究,利用基因工程手段快速提高棉花品種的耐鹽性,對于充分利用我國大面積的鹽堿地資源以及解決糧棉爭地問題有著重要的作用。質子泵焦磷酸水解酶(VP)是生物體內一種重要的質子泵,能夠水解焦磷酸釋放能量,在調節(jié)細胞膨壓,膜內外電勢差以及胞內小分子的主動運輸過程中發(fā)揮重要的作用。植物在受到鹽脅迫作用時,VP能夠為液泡提供能量積累無機離子和其他溶質,提高植物的耐鹽性。本研究參考AD基因組數(shù)據(jù),對陸地棉VP基因家族進行了鑒定分析。利用陸地棉材料中9807,成功克隆GhVP1基因,并結合RNAi技術和VIGS技術,成功構建干擾載體和VIGS載體,對GhVP1基因的功能展開分析,主要研究結果如下:1.比較系統(tǒng)地分析了陸地棉AD基因組VP基因家族。以GhVP基因(Gene Bank No.:ADN96173.1)為參考序列,參考棉花四倍體(AD組)基因組信息,篩選鑒定獲得13個VP基因家族成員(GhVP1-GhVP13)。分析表明,長期進化過程里,不同物種間基因結構有一定的變化,但相同物種間仍保留大部分結...

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 棉花耐鹽方面的研究
        1.1.1 耐鹽性研究的重要性
        1.1.2 鹽脅迫對棉花的影響
        1.1.3 棉花耐鹽基因研究
    1.2 VP基因的研究進展
    1.3 VIGS研究進展
        1.3.1 VIGS技術原理
        1.3.2 VIGS載體的構建
        1.3.3 VIGS的效率和應用
    1.4 RNAi研究進展
        1.4.1 RNAi作用機制及特點
        1.4.2 RNAi技術應用
    1.5 植物轉基因技術
        1.5.1 轉基因技術和方法
        1.5.2 棉花轉基因現(xiàn)狀
    1.6 立題依據(jù)
第二章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 供試材料
        2.1.2 實驗菌株與載體質粒
        2.1.3 引物、酶、與試劑盒
        2.1.4 培養(yǎng)基、抗生素的配制
    2.2 試驗方法
        2.2.1 材料處理方法
        2.2.2 陸地棉VP基因家族分析
        2.2.3 GhVP基因目的片段的獲得
        2.2.4 RNAi載體的構建
        2.2.5 VIGS載體的構建
        2.2.6 RNAi載體花絮法轉化擬南芥
        2.2.7 VIGS載體浸染棉花
        2.2.8 RNA的提取
    2.3 轉GhVP1基因棉花的檢測
        2.3.1 DNA的提取
        2.3.2 轉基因分子檢測
第三章 結果與分析
    3.1 VP基因家族的全基因組鑒定和分析
        3.1.1 GhVP基因家族成員的鑒定
        3.1.2 VP基因家族蛋白結構域和motif分析
        3.1.3 GhVP基因家族的基因結構分析
        3.1.4 VP基因家族的進化分析
    3.2 GhVP的功能分析
        3.2.1 GhVP在擬南芥中的功能分析
        3.2.2 GhVP在棉花中的功能分析
    3.3 轉GhVP1基因棉花分子檢測
第四章 討論
    4.1 陸地棉VP基因家族的討論
    4.2 VP基因的討論
    4.3 棉花轉基因檢測
第五章 全文結論
參考文獻
致謝
作者簡歷



本文編號：3810648