人參(Panax ginseng C.A.Mey)、西洋參(P.quinquefolius L.)、三七(P.notoginseng(Burk.)F.H.chen)三種是人參屬代表性藥用植物,具有較高的藥用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值,受到研究學(xué)者的高度重視。然而,目前有關(guān)三者的研究工作多集中在栽培、生理、藥理藥化等方面,而對(duì)其遺傳特性方面的研究相對(duì)較少,從而制約了一些分子生物技術(shù)在人參屬藥用植物中的應(yīng)用。本文以三種人參屬藥用植物不同分生組織為試材,優(yōu)化了各物種材料的染色體制片技術(shù),以PCR法篩選到的rDNA序列為探針,對(duì)三種人參屬藥用植物進(jìn)行雙色熒光原位雜交,并分析其核型和親緣關(guān)系。主要研究結(jié)果如下:1.通過(guò)對(duì)人參屬藥用植物不同材料染色體制片的影響因素進(jìn)行對(duì)比研究,優(yōu)化了不同材料染色體制片技術(shù)。結(jié)果表明:染色體制片取材是關(guān)鍵,組培苗根尖長(zhǎng)至2cm,種子根尖長(zhǎng)至1.5cm,參苗根尖長(zhǎng)至1cm,愈傷組織繼代后6-9d時(shí),取材適宜。三種根尖經(jīng)0℃冰水預(yù)處理10-15h或2mmol/L 8-羥基喹啉預(yù)處理2-6h,染色體形態(tài)清晰,愈傷組織0℃放置24h,染色體聚縮程度適中。37℃水浴條件下,組培苗根尖和參...

【文章頁(yè)數(shù)】：73 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 人參屬藥用植物染色體核型及親緣關(guān)系研究概況
    1.2 熒光原位雜交技術(shù)
        1.2.1 植物靶DNA制片
        1.2.2 探針類型和標(biāo)記
    1.3 熒光原位雜交衍生技術(shù)
        1.3.1 多色熒光原位雜交
        1.3.2 基因組原位雜交
        1.3.3 比較基因組原位雜交
        1.3.4 細(xì)菌或酵母人工染色體熒光原位雜交技術(shù)
        1.3.5 三維熒光原位雜交技術(shù)
        1.3.6 原位PCR
    1.4 熒光原位雜交在人參屬藥用植物中的研究應(yīng)用
        1.4.1 基因定位檢測(cè)
        1.4.2 染色體核型分析
        1.4.3 遠(yuǎn)緣雜種及外源染色體檢測(cè)
        1.4.4 種間親緣關(guān)系研究
        1.4.5 多倍體起源與進(jìn)化研究中的應(yīng)用
    1.5 研究?jī)?nèi)容及目的意義
        1.5.1 研究?jī)?nèi)容
        1.5.2 研究目的及意義
第二章 人參屬藥用植物染色體制片技術(shù)優(yōu)化
    2.1 試驗(yàn)材料
    2.2 試驗(yàn)儀器與試劑
        2.2.1 主要試驗(yàn)儀器
        2.2.2 試驗(yàn)試劑
    2.3 試驗(yàn)方法
        2.3.1 取材
        2.3.2 預(yù)處理
        2.3.3 解離
        2.3.4 染色
        2.3.5 制片
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 取材時(shí)間
        2.4.2 預(yù)處理時(shí)間
        2.4.3 解離時(shí)間
        2.4.4 染色方法
        2.4.5 制片方法
    2.5 討論
第三章 人參屬藥用植物rDNA篩選與重組克隆
    3.1 試驗(yàn)材料
    3.2 試驗(yàn)儀器及試劑
        3.2.1 主要試驗(yàn)儀器
        3.2.2 試驗(yàn)試劑
    3.3 試驗(yàn)方法
        3.3.1 DNA提取
        3.3.2 rDNA擴(kuò)增
        3.3.3 rDNA回收
        3.3.4 rDNA重組克隆
        3.3.5 陽(yáng)性克隆檢測(cè)
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 DNA提取結(jié)果
        3.4.2 rDNA擴(kuò)增
        3.4.3 rDNA回收
        3.4.4 rDNA重組克隆及陽(yáng)性克隆檢測(cè)
    3.5 討論
第四章 熒光原位雜交及核型分析
    4.1 試驗(yàn)材料
    4.2 試驗(yàn)儀器及試劑
        4.2.1 主要試驗(yàn)儀器
        4.2.2 試驗(yàn)試劑
    4.3 試驗(yàn)方法
        4.3.1 質(zhì)粒提取
        4.3.2 探針標(biāo)記
        4.3.3 原位雜交
        4.3.4 洗片、鏡檢
        4.3.5 核型分析
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 人參屬藥用植物各探針原位雜交結(jié)果
        4.4.2 人參染色體核型分析
        4.4.3 西洋參染色體核型分析
        4.4.4 三七染色體核型分析
        4.4.5 核型似近系數(shù)聚類分析
    4.5 討論
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
    附錄一：rDNA回收測(cè)序結(jié)果
    附錄二：試驗(yàn)試劑配方
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3787806