發(fā)布時(shí)間：2023-01-15 18:40

　　miRNA是生物體內(nèi)起重要調(diào)控作用的一類非編碼小RNA分子,在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因表達(dá),參與生長(zhǎng)發(fā)育、抗逆等生物學(xué)過(guò)程。高通量測(cè)序法是鑒定植物中miRNA最有效的方法之一。提取鹽脅迫處理不同時(shí)間的水稻根、莖和葉部的總RNA,從中分離18～30 nt小分子RNA構(gòu)建文庫(kù),進(jìn)行高通量測(cè)序,對(duì)miRNA表達(dá)譜特性進(jìn)行了分析。結(jié)果表明,所有樣品共檢測(cè)到248個(gè)已知的miRNA,來(lái)源于132個(gè)不同的家族,根、莖、葉中分別有31、11、9個(gè)差異表達(dá)miRNA,分屬于29個(gè)家族,靶向592個(gè)功能基因,并對(duì)其中5個(gè)差異顯著且與非生物脅迫相關(guān)的重要miRNA進(jìn)行了qPCR分析檢測(cè),結(jié)果顯示Osa-miR166h、Osa-miR166k上調(diào)表達(dá),Osa-miR169h、Osa-miR530下調(diào)表達(dá),針對(duì)Osa-miR169h的4個(gè)靶基因進(jìn)一步定量檢測(cè),其中的3個(gè)靶基因上調(diào)表達(dá),這與Osa-miR169h的下調(diào)表達(dá)結(jié)果相一致,以上結(jié)果說(shuō)明miRNA在植物抵御非生物逆境脅迫的過(guò)程中扮演重要角色。 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗(yàn)材料
        1.1.1 供試水稻材料
        1.1.2 試劑與試劑盒
    1.2 水稻材料的培養(yǎng)與處理
    1.3 小RNA文庫(kù)構(gòu)建
    1.4 已知miRNA的獲取
    1.5 差異表達(dá)miRNA分析
    1.6 靶基因預(yù)測(cè)及功能分類
    1.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)
2 結(jié)果與分析
    2.1 不同組織鹽處理?xiàng)l件下的小RNA高通量測(cè)序
    2.2 水稻中小RNA的豐度變化
    2.3 差異表達(dá)的已知miRNA
        2.3.1 根部差異表達(dá)miRNA
        2.3.2 莖部差異表達(dá)miRNA
        2.3.3 葉部差異表達(dá)miRNA
    2.4 miRNA的靶基因預(yù)測(cè)與GO分類
    2.5 熒光定量分析差異基因
        2.5.1 miRNA驗(yàn)證
        2.5.2 靶基因驗(yàn)證
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]鹽、干旱脅迫下水稻相關(guān)miRNA的鑒定及表達(dá)分析[J]. 彭廷,文慧麗,趙亞帆,王博博,金玉蔓,孫紅正,趙全志.  華北農(nóng)學(xué)報(bào). 2018(02)
[2]鹽穗木miRNA417的克隆及對(duì)種子萌發(fā)和幼苗成活率的影響[J]. 鮑乾,徐濤,張富春.  植物研究. 2011(04)
[3]鹽脅迫條件下不同耐鹽棉花miRNA差異表達(dá)研究[J]. 李春賀,陰祖軍,劉玉棟,沈法富.  山東農(nóng)業(yè)科學(xué). 2009(07)



本文編號(hào)：3731367