靈芝是具有廣闊應用前景的藥用原材料,其關鍵活性成分三萜化合物具有重要藥理作用。但靈芝細胞中三萜含量和產(chǎn)量均較低,限制了其規(guī)�；瘧�。本論文采用液體深層發(fā)酵（細胞培養(yǎng)）技術,研究了外源誘導子薏苡仁油對靈芝深層發(fā)酵過程中三萜合成的影響,發(fā)現(xiàn)適宜濃度的薏苡仁油可顯著提高靈芝三萜的合成量和產(chǎn)量;進一步從信號轉導的角度分析了薏苡仁油誘導靈芝三萜合成的基本作用機制。主要研究內容和結果如下:1.誘導子（薏苡仁油）在1.5g/L濃度下,可顯著促進靈芝菌絲體生長和靈芝三萜的合成量,且誘導子在菌絲體細胞指數(shù)生長末期到穩(wěn)定期早期加入表現(xiàn)最為敏感,這種作用可在較長時間內誘導靈芝菌絲體細胞產(chǎn)次級代謝產(chǎn)物。2.添加薏苡仁油可有效誘導靈芝細胞中NO濃度、PAL活性和CYP450含.量的增加,且NO可以作為PAL活化和CYP450產(chǎn)生的上游信號分子起作用,它是薏苡仁油誘導靈芝菌絲體細胞中PAL活化和CYP450產(chǎn)生信號轉導、靈芝三萜合成積累途徑中必定產(chǎn)生、但不是唯一的信號分子。3.H2O2位于PAL活化和CYP450產(chǎn)生的上游,薏苡仁油誘導靈芝三萜合成通過H2O2所介導的信號轉導途徑,但H2O2途徑并不是薏苡仁油誘導... 

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 研究背景
    1.1 微生物深層發(fā)酵生產(chǎn)次生代謝產(chǎn)物的研究現(xiàn)狀
    1.2 微生物細胞次生代謝產(chǎn)物合成調控研究現(xiàn)狀
        1.2.1 營養(yǎng)物質對代謝產(chǎn)物的影響
        1.2.2 前體物質的添加對次生代謝的影響
        1.2.3 環(huán)境因素對次生代謝的影響
        1.2.4 誘導子對次生代謝的影響
    1.3 NO和H_2O_2對微生物細胞次生代謝產(chǎn)物合成的作用
        1.3.1 NO和H_2O_2產(chǎn)生的途徑及生理功能
        1.3.2 NO和H_2O_2的信號轉導機制及相互作用
    1.4 靈芝三萜的結構、種類、代謝物產(chǎn)生途徑、誘導子的調節(jié)及其藥理作用
        1.4.1 靈芝三萜的結構及種類
        1.4.2 靈芝三萜的代謝物產(chǎn)生途徑
        1.4.3 靈芝三萜合成的誘導調節(jié)
        1.4.4 靈芝三萜的生理作用
    1.5 論文選題目的和意義
2 薏苡仁油誘導靈芝菌絲體合成靈芝三萜
    2.1 引言
    2.2 材料和方法
        2.2.1 實驗材料
        2.2.2 實驗試劑
        2.2.3 實驗儀器
        2.2.4 實驗方法
    2.3 結果與分析
        2.3.1 熊果酸標準曲線制作
        2.3.2 靈芝菌絲體細胞生長曲線
        2.3.3 薏苡仁油對靈芝菌絲體細胞生長的影響
        2.3.4 薏苡仁油對靈芝三萜含量的影響
    2.4 結論與討論
3 NO介導薏苡仁油誘導靈芝三萜合成的信號轉導
    3.1 引言
    3.2 材料和方法
        3.2.1 實驗材料
        3.2.2 實驗試劑
        3.2.3 實驗儀器
        3.2.4 誘導及處理方法
    3.3 結果與分析
        3.3.1 NaNO_2標準曲線
        3.3.2 牛血清蛋白標準曲線
        3.3.3 薏苡仁油誘導細胞中NO釋放、PAL活化及CYP450產(chǎn)生
        3.3.4 NO是薏苡仁油誘發(fā)PAL活化及CYP450產(chǎn)生的上游信號
        3.3.5 SNP對PAL活性和CYP450含量的影響
        3.3.6 cPITO和L-NNA對薏苡仁油誘導細胞合成靈芝三萜的影響
    3.4 結論與討論
4 H_2O_2介導薏苡仁油誘導靈芝三萜合成的信號轉導
    4.1 引言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 實驗材料
        4.2.2 實驗試劑
        4.2.3 實驗儀器
        4.2.4 誘導及處理方法
    4.3 結果與分析
        4.3.1 過氧化氫標準曲線繪制
        4.3.2 薏苡仁油誘發(fā)細胞中H_2O_2釋放、PAL活化和CYP450產(chǎn)生
        4.3.3 H_2O_2對PAL活化和CYP450產(chǎn)生的作用
        4.3.4 薏苡仁油誘導下PAL活性和CYP450含量對H_2O_2濃度的依賴性
    4.4 結論與討論
5 NO和H_2O_2在薏苡仁油誘導靈芝三萜生物合成過程中的相互作用
    5.1 引言
    5.2 材料和方法
        5.2.1 實驗材料
        5.2.2 實驗試劑
        5.2.3 實驗儀器
        5.2.4 誘導及處理方法:
    5.3 結果與分析
        5.3.1 H_2O_2在介導薏苡仁油誘導靈芝三萜合成過程對NO的依賴性
        5.3.2 NO在介導薏苡仁油誘導靈芝三萜合成過程對H_2O_2的依賴性
        5.3.3 H_2O_2與NO通過獨立途徑介導薏苡仁油誘導靈芝三萜的生物合成
    5.4 結論和討論
6 主要結論
參考文獻
附錄 攻讀學位期間的主要學術成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3705332