利用活體成像系統(tǒng)檢測轉(zhuǎn)基因玉米中熒光素酶信號整株實(shí)時(shí)篩選高表達(dá)的轉(zhuǎn)基因玉米。結(jié)果表明,按照信噪比大于2為高表達(dá)轉(zhuǎn)基因陽性植株的標(biāo)準(zhǔn),獲得的T₁代66株轉(zhuǎn)pMD35LUC的植株中,11株有熒光信號,其中2株信噪比值大于2;獲得的T₁代68株轉(zhuǎn)化pMDUBLUC的植株中,30株有熒光信號,6株信噪比值大于2。信噪比值大于2的植株移栽成活7株,經(jīng)PCR檢測均為陽性。2株T₁植株的T₂代植株無熒光信號值;5株T₁植株的T₂代植株都有數(shù)量不等的植株有熒光信號,其中4株T₁株都有信噪比值大于2的T₂代植株,經(jīng)PCR檢測均為陽性。本研究跳過一系列大量的操作復(fù)雜、耗時(shí)、高成本的體外分子檢測,直觀、準(zhǔn)確、實(shí)時(shí)、低成本地淘汰大量非轉(zhuǎn)基因和表達(dá)不強(qiáng)的植株或株系,為玉米轉(zhuǎn)基因植株的篩選提供了有效方法。 

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 結(jié)果與分析
    1.1 載體構(gòu)建
    1.2 轉(zhuǎn)化玉米
    1.3 T1代陽性植株的檢測
        1.3.1 活體成像系統(tǒng)檢測信號按信噪比確定候選轉(zhuǎn)基因植株
        1.3.2 PCR檢測進(jìn)一步證實(shí)
    1.4 T2代陽性植株的檢測
        1.4.1 活體成像系統(tǒng)檢測信號按信噪比確定候選轉(zhuǎn)基因植株
2 討論
3 材料與方法
    3.1 試驗(yàn)材料
    3.2 載體構(gòu)建
        3.2.1 構(gòu)建pMD18T-Nos
        3.2.2 構(gòu)建pMD18T-Luc-Nos
        3.2.3 構(gòu)建pMD18T-35S-Luc-Nos
        3.2.4 構(gòu)建pMD18T-Ub-Lus-Nos
    3.3 轉(zhuǎn)化玉米
    3.4 活體成像系統(tǒng)下檢測受檢植株的熒光信號
    3.5 候選轉(zhuǎn)基因植株的PCR檢測


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]GUS報(bào)告系統(tǒng)在植物基因功能研究中的應(yīng)用和優(yōu)化[J]. 楊丹丹,王俊杰,梁衛(wèi)紅.  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2014(08)
[2]植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 駱翔,劉志頤,章樹民,申碩,王德福,王勁松.  中國農(nóng)學(xué)通報(bào). 2014(15)
[3]花粉介導(dǎo)法將TaPHR1∷GFP融合蛋白基因?qū)胗衩譡J]. 王秀紅,白建榮,孫毅,劉惠民,史向遠(yuǎn),任志強(qiáng).  西北植物學(xué)報(bào). 2011(09)
[4]中國作物分子設(shè)計(jì)育種[J]. 王建康,李慧慧,張學(xué)才,尹長斌,黎裕,馬有志,李新海,邱麗娟,萬建民.  作物學(xué)報(bào). 2011(02)
[5]兩種根癌土壤桿菌介導(dǎo)的熒光素酶在植物體內(nèi)表達(dá)分析[J]. 薛楊,趙文軍,孫現(xiàn)超,青玲,楊水英.  西南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2010(12)
[6]轉(zhuǎn)基因植物的檢測策略和檢測技術(shù)[J]. 張瑩,張永軍,吳孔明,趙奎軍,彭于發(fā),郭予元.  植物保護(hù). 2007(01)
[7]植物功能基因組研究方法及進(jìn)展[J]. 高澤發(fā),陳緒清,楊鳳萍,梁榮奇,張立全,張曉東.  生物學(xué)雜志. 2005(06)
[8]抗除草劑基因和熒光素酶基因在小麥愈傷組織中的穩(wěn)定表達(dá)[J]. 楊書禮,曾君祉,吳有強(qiáng),朱小平,王東江,張健.  Journal of Integrative Plant Biology. 1993(11)



本文編號：3700578