油菜是我國(guó)主要的油料作物,細(xì)胞質(zhì)雄性不育是油菜雜種優(yōu)勢(shì)利用的重要途徑。hau CMS是華中農(nóng)業(yè)大學(xué)傅廷棟院士1999年發(fā)現(xiàn)的天然芥菜型油菜雄性不育,是一種全新的油菜胞質(zhì)不育類(lèi)型,不育徹底穩(wěn)定,不受溫度等環(huán)境因素影響,在生產(chǎn)上有廣闊的應(yīng)用前景。本研究以甘藍(lán)型油菜hau CMS不育系、保持系、育性恢復(fù)株為材料,通過(guò)Western Blot檢測(cè)不育基因的蛋白表達(dá)模式;結(jié)合iTRAQ和生物信息學(xué)技術(shù)鑒定甘藍(lán)型油菜hau CMS不育系和保持系的差異表達(dá)蛋白,分析差異表達(dá)蛋白的代謝路徑與花藥敗育的關(guān)系;以不育基因orf288為誘餌構(gòu)建載體進(jìn)行酵母雙雜交,篩選甘藍(lán)型油菜花蕾cDNA文庫(kù),尋找與不育蛋白發(fā)生互作的因子,旨在從蛋白水平分析hau CMS敗育的分子機(jī)制。主要研究結(jié)果如下:1.orf288不育相關(guān)基因的翻譯模式分析通過(guò)設(shè)計(jì)不育相關(guān)蛋白ORF288的特異性抗體對(duì)hau CMS不育系、保持系和恢復(fù)材料的小花蕾總蛋白進(jìn)行Western雜交,從蛋白水平上驗(yàn)證了orf288可能是導(dǎo)致不育的基因,且可能是從轉(zhuǎn)錄本的第二個(gè)起始密碼子處開(kāi)始功能蛋白翻譯的。2.酵母雙雜篩選與orf288互作基因以基因orf2... 

【文章頁(yè)數(shù)】：92 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語(yǔ)表
文獻(xiàn)綜述
    1.1 前言
    1.2 植物細(xì)胞質(zhì)雄性不育概述
        1.2.1 雜種優(yōu)勢(shì)與雄性不育
        1.2.2 胞質(zhì)不育與線粒體
        1.2.3 胞質(zhì)不育的作用機(jī)理研究進(jìn)展
    1.3 油菜hau CMS研究基礎(chǔ)
        1.3.1 hau CMS不育系的特征
        1.3.2 油菜hau CMS的不育機(jī)制
    1.4 蛋白組學(xué)相關(guān)進(jìn)展
        1.4.1 蛋白質(zhì)組學(xué)的概念、研究?jī)?nèi)容及意義
        1.4.2 蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)解析
    1.5 植物細(xì)胞蛋白降解途徑研究進(jìn)展
        1.5.1 蛋白酶體降解途徑及對(duì)植物生長(zhǎng)發(fā)育的調(diào)控
        1.5.2 植物細(xì)胞自噬分子機(jī)制及生理功能
    1.6 本研究目的意義及技術(shù)路線
2. 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株與載體
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 植物組織取樣
        2.2.2 CTAB法提取植物葉片總DNA
        2.2.3 Western Blot
        2.2.4 酵母雙雜交
        2.2.5 iTRAQ及生物信息學(xué)分析
        2.2.6 植物組織總RNA提取與反轉(zhuǎn)錄
        2.2.7 Real Time-PCR
3. 結(jié)果與分析
    3.1 不育相關(guān)蛋白的表達(dá)情況
        3.1.1 抗體設(shè)計(jì)
        3.1.2 蛋白完整性分析
        3.1.3 特異抗體雜交檢測(cè)分析
    3.2 不育系與保持系差異表達(dá)蛋白的iTRAQ鑒定
        3.2.1 花藥蛋白鑒定結(jié)果
        3.2.2 所有鑒定到的蛋白的COG分析
        3.2.3 差異表達(dá)蛋白篩選
        3.2.4 差異表達(dá)蛋白的GO富集分析
        3.2.5 差異表達(dá)蛋白KEGG ORTHOLOGY代謝通路分析
        3.2.6 差異表達(dá)蛋白R(shí)T-PCR驗(yàn)證
    3.3 酵母雙雜交結(jié)果分析
        3.3.1 構(gòu)建誘餌載體
        3.3.2 自激活和毒性驗(yàn)證
        3.3.3 互作蛋白篩選
        3.3.4 點(diǎn)對(duì)點(diǎn)驗(yàn)證
4.討論
    4.1 不育相關(guān)基因orf288翻譯模式分析
    4.2 甘藍(lán)型油菜hau CMS不育系和保持系孢原細(xì)胞分化期的總蛋白質(zhì)譜分析
    4.3 差異表達(dá)蛋白與蛋白降解相關(guān)
    4.4 對(duì)甘藍(lán)型油菜hau CMS不育分子機(jī)理的猜想
參考文獻(xiàn)
附錄
    附錄 1 186 個(gè)顯著差異表達(dá)蛋白列表
    附錄 2 qPCR所用引物列表
    附錄 3 BD-288 三次篩庫(kù)結(jié)果
    附錄 4 BD-185 三次篩庫(kù)結(jié)果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]屬間體細(xì)胞雜交創(chuàng)建甘藍(lán)型油菜細(xì)胞質(zhì)雄性不育系及其鑒定[J]. 胡瓊,李云昌,梅德圣,方小平,Lise N. Hansen,Sven B. Andersen.  中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2004(03)
[2]泛素-蛋白酶體途徑及意義[J]. 吳慧娟,張志剛.  國(guó)際病理科學(xué)與臨床雜志. 2006(01)
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[10]依托科技創(chuàng)新推進(jìn)我國(guó)油菜產(chǎn)業(yè)發(fā)展[J]. 熊秋芳,文靜,沈金雄.  農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)問(wèn)題. 2013(01)

博士論文
[1]油菜hau CMS線粒體基因組和不育基因的研究[D]. 衡雙平.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[2]芥菜型油菜胞質(zhì)不育Hau CMS不育相關(guān)基因的鑒定及其功能分析[D]. 景兵.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3698920