花椒（Zanthoxylum bungeanum Maxim）為蕓香科花椒屬植物,具有很高的食用及藥用價值。麻味素是花椒中產生風味和藥用活性的特有成分,現已分離出27種,均為不飽和脂肪酸酰胺類物質。目前對這類化合物在花椒中合成調控和次生代謝途徑的研究較少,僅有文獻報道麻味素可能由氨基酸脫羧后的產物和不飽和脂肪酸兩部分結合組成,但具體的合成通路至今尚未闡釋清楚。課題組前期對麻味素積累差異大的三個花椒品種進行了轉錄組測序,篩選出19個與不飽和脂肪酸、纈氨酸、亮氨酸及異亮氨酸生物合成相關的差異基因。本研究在此基礎上針對不飽和脂肪酸合成過程中的兩個關鍵基因（c99494 graph＿c0和c102796 graph＿c0）進行了功能的初步驗證,旨在為麻味素合成通路的進一步闡明提供理論依據。主要結果如下:1. 對轉錄組獲得的目的基因c99494 graph＿c0和c102796 graph＿c0全長c DNA序列進行生物信息學分析,同源序列比對表明,其屬于不飽和脂肪酸脫氫酶并預測兩個目的基因分別為Zb FAD2和Zb FAD3。通過ORF Finder分析確定兩個目的基因的讀碼框長度分別為115... 

【文章頁數】：80 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1.1 花椒概述
    1.2 花椒麻味素研究進展
        1.2.1 花椒麻味素的提取分離
        1.2.2 花椒麻味素的生物活性
        1.2.3 花椒麻味素的合成途徑
    1.3 花椒分子生物學研究進展
    1.4 不飽和脂肪酸酶基因同源序列研究現狀
    1.5 研究目的意義
    1.6 研究內容
    1.7 技術路線
第二章 目的基因的克隆和序列分析
    2.1 試驗材料、儀器與試劑
        2.1.1 試驗材料
        2.1.2 儀器和試劑
    2.2 試驗方法
        2.2.1 生物信息學分析
        2.2.2 花椒RNA的提取
        2.2.3 第一鏈cDNA的合成
        2.2.4 目的基因的擴增
        2.2.5 PCR產物的回收
        2.2.6 加A尾
        2.2.7 克隆載體的連接
        2.2.8 連接產物的轉化
        2.2.9 陽性克隆篩選及測序分析
        2.2.10 提取質粒
        2.2.11 雙酶切
        2.2.12 產物回收與純化
    2.3 結果與分析
        2.3.1 目的基因同源性分析
        2.3.2 系統(tǒng)進化樹的構建
        2.3.3 目的基因結構域預測
        2.3.4 蛋白性質與結構預測
        2.3.5 韓城無刺花椒總RNA提取
        2.3.6 目的基因片段的序列分析及擴增
        2.3.7 重組質粒的檢測
    2.4 小結
第三章 目的基因的原核表達
    3.1 試驗材料、儀器與試劑
        3.1.1 試驗材料
        3.1.2 儀器和試劑
    3.2 試驗方法
        3.2.1 雙酶切
        3.2.2 產物回收與純化
        3.2.3 目的基因連接載體
        3.2.4 連接產物轉化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細胞
        3.2.5 陽性克隆篩選及測序分析
        3.2.6 重組質粒轉化大腸桿菌BL21感受態(tài)細胞
        3.2.7 重組蛋白的誘導表達
        3.2.8 重組蛋白的功能檢測
    3.3 結果與分析
        3.3.1 原核表達載體的構建
        3.3.2 連接后的陽性重組子檢測
        3.3.3 重組質粒轉化大腸桿菌BL21感受態(tài)細胞
        3.3.4 重組蛋白的提取與純化
        3.3.5 重組蛋白與底物反應檢測
    3.4 小結
第四章 目的基因的真核表達
    4.1 試驗材料與試劑
        4.1.1 試驗材料
        4.1.2 試驗儀器與試劑
    4.2 試驗方法
        4.2.1 雙酶切
        4.2.2 產物回收與純化
        4.2.3 目的基因連接載體
        4.2.4 連接產物轉化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細胞
        4.2.5 陽性克隆篩選及測序分析
        4.2.6 重組質粒轉化農桿菌GV3101感受態(tài)細胞
        4.2.7 注射法轉化煙草
        4.2.8 花序侵染法轉化擬南芥
        4.2.9 擬南芥轉基因株系功能鑒定
        4.2.10 轉基因煙草測定
    4.3 結果與分析
        4.3.1 菌液PCR鑒定結果
        4.3.2 雙酶切鑒定結果
        4.3.3 測序鑒定結果
        4.3.4 重組質粒轉化農桿菌GV3101感受態(tài)細胞
        4.3.5 轉基因擬南芥測定
        4.3.6 煙草基因與麻味素化合物測定
    4.4 小結
第五章 結論與展望
    5.1 結論
    5.2 創(chuàng)新點
    5.3 展望
參考文獻
致謝
個人簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[3]花椒麻味物質分子印跡聚合物的制備及吸附特性研究[D]. 李耀.西南大學 2017
[4]花椒種質資源數量性狀統(tǒng)計分析及愈傷組織誘導研究[D]. 崔丹.西北農林科技大學 2016
[5]轉Bt基因歐洲黑楊組織培養(yǎng)再生體系優(yōu)化及其TA29-Barnase基因遺傳轉化[D]. 朱偉康.西北農林科技大學 2016
[6]黃芩黃酮合酶基因的克隆及分析[D]. 劉一杰.大連工業(yè)大學 2016
[7]紫花玉簪愈傷組織的誘導及農桿菌介導遺傳轉化體系的建立[D]. 徐麗萍.吉林農業(yè)大學 2015
[8]花椒麻素對肝癌細胞生理功效及機理研究[D]. 周敏.西南大學 2014
[9]花椒麻素降血脂的功能性評價及作用機理的研究[D]. 呂嬌.西南大學 2014
[10]花椒種質資源遺傳多樣性研究[D]. 李曉.西北農林科技大學 2011



本文編號：3681194