【目的】葉綠素是參與光合途徑最為重要的光合色素。葉綠體的發(fā)育及葉綠素的合成在很大程度上依賴于質(zhì)體基因組與核基因組之間的雙向信號傳導(dǎo)來精確協(xié)調(diào)基因表達(dá)。通過對白化表型的CRISPR/Cas9-ZmpTAC2轉(zhuǎn)基因陽性純合突變材料進(jìn)行RNA-seq研究,篩選和鑒定參與葉綠素合成的相關(guān)基因,為明確葉綠素的合成途徑奠定基礎(chǔ)。【方法】以CRISPR/Cas9-ZmpTAC2玉米轉(zhuǎn)基因編輯純合突變株系為研究材料,使用透射電鏡觀察葉綠體超微結(jié)構(gòu)和分光光度法測定葉片葉綠素含量,確定葉綠體發(fā)育狀態(tài)及葉綠素合成情況。對轉(zhuǎn)基因陰性材料（CK）和CRISPR/Cas9-ZmpTAC2轉(zhuǎn)基因純合編輯材料（zmptac2）苗期葉片取樣進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序。通過生物信息學(xué)分析,尋找CK與zmptac2間差異表達(dá)的基因;qRT-PCR對差異表達(dá)基因進(jìn)行驗(yàn)證。通過酵母雙雜交篩選與玉米pTAC2互作的蛋白質(zhì)�！窘Y(jié)果】共獲得15株T0轉(zhuǎn)基因植株,包括綠色植株（7株）和白色植株（8株）。綠色幼苗中3株為轉(zhuǎn)基因陰性材料,4株為轉(zhuǎn)基因陽性（2株為未編輯,2株為雜合編輯突變）,白色植株（8株）均為轉(zhuǎn)基因陽性純合編輯。與CK相比,突變體（... 

【文章頁數(shù)】：16 頁

【文章目錄】：
0 引言
1 材料與方法
    1.1 試驗(yàn)材料
    1.2 轉(zhuǎn)基因株系陽性鑒定
    1.3 潛在脫靶位點(diǎn)分析
    1.4 zmptac2突變體的葉綠體超微結(jié)構(gòu)觀察
    1.5 葉綠素含量的測定
    1.6 苗期葉片RNA提取、轉(zhuǎn)錄組建庫及測序
    1.7 測序結(jié)果分析
    1.8 qRT-PCR驗(yàn)證
    1.9 酵母單雜交轉(zhuǎn)錄激活活性分析
    1.1 0 ZmpTAC2互作蛋白捕捉
2 結(jié)果
    2.1 zmptac2表型及轉(zhuǎn)基因植株陽性編輯情況
    2.2 zmptac2突變體脫靶效應(yīng)評估
    2.3 zmptac2突變體的葉綠體超微結(jié)構(gòu)及葉綠素含量測定
    2.4 CK與zmptac2幼苗葉片轉(zhuǎn)錄組測序質(zhì)量分析
    2.5 差異表基因的表達(dá)分析及GO功能富集分析
    2.6 差異表達(dá)基因Pathway富集分析
    2.7 qRT-PCR驗(yàn)證
    2.8 酵母雙雜及轉(zhuǎn)錄激活活性分析
3 討論
4 結(jié)論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[4]細(xì)胞周期蛋白cyclin B1與腫瘤[J]. 趙春玲,宋詠梅,樊飛躍,詹啟敏.  腫瘤. 2007(04)
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[7]兩種氨基酸和三種遺傳病[J]. 吳久利.  生物學(xué)教學(xué). 2005(10)
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博士論文
[1]小黑楊PsnCYCD1;1基因參與細(xì)胞分裂及次生生長作用機(jī)理研究[D]. 鄭唐春.東北林業(yè)大學(xué) 2016

碩士論文
[1]果糖激酶類似蛋白1,2與硫氧還蛋白Z互作調(diào)控水稻葉綠體發(fā)育[D]. 張森.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2018
[2]pTAC7調(diào)控?cái)M南芥葉綠基因表達(dá)的機(jī)理研究[D]. 葉琳珊.上海師范大學(xué) 2015



本文編號：3672643