黃花苜蓿（Medicago falcata L.）是一種非�？购�、抗寒、耐鹽堿、耐貧瘠的豆科牧草,是高寒地區(qū)人工牧草種植和天然草地改良的理想牧草,是苜�？剐杂N不可或缺的種質資源。因此,從中挖掘抗寒基因,揭示抗寒機制具有重要意義。本研究以黃花苜蓿和抗寒性較差的柱花草（Stylosanthes guianensis）為材料,參照黃花苜蓿和截型苜蓿低溫響應基因表達譜,從黃花苜蓿中克隆了一個響應低溫顯著上調表達的未知功能基因MfCML24,獲得過表達MfCML24的轉基因柱花草,分析它們的表型及抗冷性,初步探討該基因的功能。主要研究結果如下:采用定量RT-PCR方法,分析了MfCML24的時空表達特征,結果表明MfCML24在葉片當中的表達量最高,其次為葉柄,在莖和根中的表達量最低,大約只有葉片表達量的1/5左右。分析了黃花苜蓿和截型苜蓿葉片中CML24基因響應低溫的動態(tài)變化,結果顯示,低溫處理1 h后MfCML24開始受到誘導,4h達到最大,而MtCML24基因不受低溫誘導。對MfCML24、MtCML24基因的啟動子序列的順式作用元件進行比對,發(fā)現MfCML24啟動子序列中除包含基本的啟... 

【文章頁數】：50 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞
1 前言
    1.1 植物抗寒性研究進展
    1.2 黃花苜�？购匝芯窟M展
    1.3 柱花草抗冷性研究進展
    1.4 CML基因功能研究進展
    1.5 本研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 PCR引物
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 培養(yǎng)基配方
    2.2 材料培養(yǎng)與處理
        2.2.1 材料培養(yǎng)
        2.2.2 材料處理
    2.3 實驗方法
        2.3.1 MfCML24基因的克隆與序列分析
        2.3.2 MfCML24基因表達分析
        2.3.3 MfCML24表達載體的構建
        2.3.4 MfCML24基因的亞細胞定位
        2.3.5 MfCML24啟動子分析
        2.3.6 農桿菌介導轉化柱花草
        2.3.7 轉基因柱花草的分子鑒定
        2.3.8 Basta抗性篩選
        2.3.9 葉綠素熒光的測定
        2.3.10 相對電導率的測定
3 結果與分析
    3.1 MfCML24及其啟動子克隆與序列分析
    3.2 亞細胞定位
    3.3 MfCML24基因的表達分析
    3.4 過表達MfCML24轉基因柱花草的獲得與分子檢測
    3.5 轉基因柱花草的Basta抗性
    3.6 轉基因柱花草的抗冷性鑒定
4 討論與結論
    4.1 MfCML24亞細胞定位
    4.2 MfCML24的時空表達特征
    4.3 MfCML24表達與植物抗寒性的關系
    4.4 結論
致謝
參考文獻


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號：3671947