大豆（Glycine max）是中國(guó)重要的農(nóng)作物之一,大豆皂苷是其重要的次生代謝產(chǎn)物之一。隨著對(duì)大豆皂苷研究的不斷深入,發(fā)現(xiàn)皂苷有諸多對(duì)人體有益的功能,因此越來越受到人們的重視。但對(duì)大豆皂苷合成代謝機(jī)制研究較少。本實(shí)驗(yàn)以山西72份大豆種質(zhì)資源為材料,采用高效液相色譜法（High performance liquid chromatography,HPLC）對(duì)72份大豆材料種子中大豆皂醇含量進(jìn)行了測(cè)定,分析了不同材料中大豆皂醇組成和含量的差異,評(píng)價(jià)了不同粒重、種皮顏色和生態(tài)類型大豆材料中大豆皂醇含量的差異性。選取大豆皂苷含量不同的大豆材料采用高效液相-電噴霧離子化串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（High performance liquid-electrospray ionization tandem mass spectrometry technology,HPLC-ESI-MS/MS）對(duì)籽粒發(fā)育過程中大豆皂苷的積累規(guī)律進(jìn)行了研究,并進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,篩選出參與大豆皂苷代謝的差異表達(dá)基因。利用qRT-PCR技術(shù)分析了大豆籽粒發(fā)育過程中以及不同組織中差異表達(dá)基因表達(dá)模式。本實(shí)驗(yàn)從轉(zhuǎn)錄組和代謝組水平上探究... 

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
第一章 前言
    1.1 引言
    1.2 大豆皂苷簡(jiǎn)介
        1.2.1 大豆皂苷組成與分類
        1.2.2 大豆皂苷的分布特征
        1.2.3 大豆皂苷的合成代謝途徑
        1.2.4 大豆皂苷的檢測(cè)方法
    1.3 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)研究進(jìn)展
    1.4 本研究的目的和意義
    1.5 技術(shù)路線
第二章 不同材料大豆皂醇含量分析
    2.1 材料與試劑
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 主要試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 大豆皂苷的提取
        2.2.2 大豆皂苷的水解
        2.2.3 大豆皂醇的檢測(cè)
        2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線
        2.2.5 數(shù)據(jù)分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 HPLC法分析大豆皂醇含量
        2.3.2 不同粒重類型大豆皂醇含量分析
        2.3.3 不同種皮顏色大豆材料皂醇含量分析
        2.3.4 野生、半野生、栽培大豆材料皂醇含量分析
        2.3.5 大豆皂醇含量與籽粒性狀的相關(guān)分析
        2.3.6 不同組織中大豆皂醇含量分析
    2.4 小結(jié)與討論
第三章 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序鑒定大豆皂苷代謝關(guān)鍵酶基因
    3.1 材料與試劑
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 取材
        3.1.3 主要儀器
        3.1.4 主要試劑
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 大豆皂苷的提取
        3.2.2 大豆皂苷的測(cè)定
        3.2.3 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 HPLC-ESI-MS/MS分析不同時(shí)期大豆籽粒皂苷含量
        3.3.2 轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析
    3.4 小結(jié)與討論
第四章 大豆GmHMGR1基因的克隆及表達(dá)分析
    4.1 材料與試劑
        4.1.1 材料
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 引物設(shè)計(jì)
        4.2.2 RNA提取
        4.2.3 DNA提取
        4.2.4 cDNA的合成
        4.2.5 PCR反應(yīng)體系
        4.2.6 qRT-PCR反應(yīng)
        4.2.7 測(cè)序
        4.2.8 基因序列生物信息學(xué)分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 DNA與RNA質(zhì)量檢測(cè)
        4.3.2 GmHMGR1基因的克隆
        4.3.3 GmHMGR1 DNA及cDNA序列分析
        4.3.4 GmHMGR1蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析
        4.3.5 GmHMGR1蛋白質(zhì)同源性分析
        4.3.6 GmHMGR1基因系統(tǒng)進(jìn)化分析
        4.3.7 GmHMGR1基因表達(dá)分析
        4.3.8 βAS基因表達(dá)分析
        4.3.9 UGT73B5基因表達(dá)分析
    4.4 小結(jié)與討論
第五章 全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
Abstract
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]不同大豆品種大豆皂苷組成分析[J]. 岳愛琴,王衛(wèi)東,徐海軍,王敏,郭春絨,趙晉忠,杜維俊.  中國(guó)糧油學(xué)報(bào). 2017(05)
[2]絞股藍(lán)法呢基焦磷酸合酶基因的克隆及其序列分析[J]. 蔣東,唐銀琳,陶晨陳,吳耀生.  生物技術(shù)通訊. 2014(02)
[3]甘草HMGR基因cDNA的克隆及功能鑒定（英文）[J]. 劉穎,許巧仙,席培宇,陳宏昊,劉春生.  藥學(xué)學(xué)報(bào). 2013(05)
[4]人參皂苷合成生物學(xué)關(guān)鍵元件HMGR基因克隆與表達(dá)分析[J]. 羅紅梅,宋經(jīng)元,李雪瑩,孫超,李春芳,駱翔,李瀅,陳士林.  藥學(xué)學(xué)報(bào). 2013(02)
[5]大豆皂甙對(duì)人肝癌細(xì)胞QGY-7703的生長(zhǎng)抑制作用研究[J]. 黃進(jìn),張民,李忠,牛雯,張聲華.  營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào). 2004(06)

碩士論文
[1]人參βAS基因的表達(dá)調(diào)控與功能分析[D]. 曹豪杰.吉林大學(xué) 2013
[2]一個(gè)中國(guó)南方野生大豆基因組深度測(cè)序及其分析[D]. 李澤鋒.浙江大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3665102