利用同源四倍體苜蓿花藥（花粉）組培獲得的單倍體植株與苜蓿二倍體野生種質(zhì)雜交可以把野生種質(zhì)攜帶的許多優(yōu)異性狀基因?qū)胨谋扼w栽培苜蓿品種中,對拓寬苜蓿的遺傳基礎(chǔ)、加快突破性新品種培育等具有重要的研究價(jià)值和實(shí)踐意義。本研究對新疆大葉紫花苜蓿（Medicago Sativa L.‘Xinjiang Daye’）利用花藥組培法,通過優(yōu)化培養(yǎng)條件,經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)鑒定倍性以獲得單倍體植株;進(jìn)一步利用不同濃度秋水仙素對單倍體進(jìn)行加倍獲得雙單倍體植株;并在二倍體水平下進(jìn)行種間遠(yuǎn)緣雜交,通過SRAP標(biāo)記法探究親本間遺傳距離及雜種的真實(shí)性;通過雜種生長當(dāng)年的株高、單株生物量等性狀表現(xiàn),明確不同倍性的各雜交組合雜種優(yōu)勢效應(yīng)的差異,為篩選新種質(zhì)及雜交親本選配提供依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:（1）優(yōu)化后的苜蓿花藥組培的再生體系提高了愈傷組織分化率（87.5%）和苜蓿單倍體植株（二倍體）的獲得率（23.7%）。單倍體植株（二倍體）組培扦插適宜的生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.1mg/L NAA+2%蔗糖+0.7%瓊脂,煉苗移栽時(shí)采用無菌營養(yǎng)土成活率最高。以苜蓿花藥組培二倍體植株的葉片為外植體,于0.2%秋水仙素+1.5%DM... 

【文章頁數(shù)】：137 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
1 前言
    1.1 單倍體誘導(dǎo)及應(yīng)用
    1.2 單倍體的鑒定
        1.2.1 染色體計(jì)數(shù)法與流式細(xì)胞術(shù)鑒定法
        1.2.2 形態(tài)學(xué)鑒定法與氣孔數(shù)鑒定法
        1.2.3 分子標(biāo)記法與遺傳標(biāo)記法
        1.2.4 放射線輻射法與其他方法
    1.3 單倍體的加倍方法
        1.3.1 秋水仙素的加倍原理
        1.3.2 秋水仙素加倍技術(shù)在雙單倍體植株誘導(dǎo)中的應(yīng)用
    1.4 苜蓿單倍體研究利用現(xiàn)狀
        1.4.1 國外苜蓿單倍體研究利用現(xiàn)狀
        1.4.2 國內(nèi)苜蓿單倍體研究利用現(xiàn)狀
    1.5 真假雜交種的鑒定方法
        1.5.1 形態(tài)學(xué)鑒定法
        1.5.2 細(xì)胞學(xué)鑒定法
        1.5.3 物理化學(xué)鑒定法
        1.5.4 生化標(biāo)記鑒定法
        1.5.5 分子標(biāo)記鑒定法
        1.5.6 SRAP技術(shù)原理與方法
        1.5.7 SRAP技術(shù)在雜交種鑒定中的應(yīng)用
    1.6 雜交育種與雜種優(yōu)勢分析
        1.6.1 雜種優(yōu)勢利用現(xiàn)狀
        1.6.2 配合力與雜種優(yōu)勢
        1.6.3 育性與雜種優(yōu)勢
        1.6.4 不同倍性材料的雜交利用
    1.7 雜交親本的選擇與雜種優(yōu)勢預(yù)測
        1.7.1 遺傳距離與雜種優(yōu)勢預(yù)測
        1.7.2 雜種優(yōu)勢群與雜種優(yōu)勢模式
    1.8 研究目的與意義
    1.9 主要研究內(nèi)容
    1.10 研究技術(shù)路線
2 苜蓿單倍體培養(yǎng)及育性鑒定
    2.1 試驗(yàn)材料與藥品
        2.1.1 材料來源
        2.1.2 試驗(yàn)藥品來源
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 組培再生體系的優(yōu)化
        2.2.2 再生植株倍性鑒定
        2.2.3 單倍體植株擴(kuò)繁
        2.2.4 煉苗移栽
        2.2.5 花粉育性鑒定
        2.2.6 自交結(jié)實(shí)率
    2.3 數(shù)據(jù)分析方法
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 愈傷組織分化培養(yǎng)基的優(yōu)化
        2.4.2 流式細(xì)胞術(shù)鑒定法的優(yōu)化
        2.4.3 根尖染色體鑒定法的優(yōu)化
        2.4.4 不同倍性苜蓿組培莖段扦插生根率
        2.4.5 不同倍性苜蓿材料煉苗移栽成活率
        2.4.6 不同倍性新疆大葉苜蓿部分器官形態(tài)差異
        2.4.7 不同倍性苜蓿自交結(jié)莢情況與種子活力
    2.5 討論
        2.5.1 外源激素對苜�；ㄋ幏只囵B(yǎng)的影響
        2.5.2 流式細(xì)胞術(shù)對植物倍性鑒定的影響因素
        2.5.3 根尖染色體鑒定的影響因素
        2.5.4 不同倍性苜蓿的自交不親和性
    2.6 小結(jié)
3 苜蓿雙單倍體植株的誘導(dǎo)
    3.1 試驗(yàn)材料與藥品
        3.1.1 材料來源
        3.1.2 試驗(yàn)藥品來源
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 固體和液體秋水仙素培養(yǎng)基
        3.2.2 愈傷組織的繼代培養(yǎng)
        3.2.3 分化與生根培養(yǎng)
        3.2.4 再生植株的倍性鑒定
    3.3 數(shù)據(jù)分析方法
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 秋水仙素處理對出愈率的影響
        3.4.2 愈傷組織繼代改良培養(yǎng)
        3.4.3 秋水仙素處理對莖段生根率的影響
        3.4.4 秋水仙素加倍處理后再生植株倍性鑒定
        3.4.5 雙單倍體植株的再分化
    3.5 討論
        3.5.1 不同培養(yǎng)方式對加倍效果的影響
        3.5.2 不同外植體對加倍效果的影響
        3.5.3 不同處理因素對加倍效果的影響
        3.5.4 愈傷組織的繼代改良
    3.6 小結(jié)
4 不同倍性和育性材料間雜交結(jié)實(shí)率的比較
    4.1 試驗(yàn)材料與雜交組合
    4.2 研究內(nèi)容與方法
        4.2.1 物候期觀測
        4.2.2 人工雜交
    4.3 數(shù)據(jù)分析方法
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 物候期
        4.4.2 不同育性苜蓿雜交組合結(jié)實(shí)率分析
        4.4.3 不同倍性苜蓿雜交組合結(jié)實(shí)率分析
        4.4.4 二倍體苜蓿種間雜交結(jié)實(shí)率分析
        4.4.5 二倍體苜蓿與扁蓿豆種間雜交結(jié)實(shí)率分析
        4.4.6 雜交時(shí)期對雜交結(jié)莢率的影響
        4.4.7 各因素對雜交結(jié)實(shí)率的影響
    4.5 討論
        4.5.1 育性對雜交結(jié)實(shí)率的影響
        4.5.2 倍性對雜交結(jié)實(shí)率的影響
        4.5.3 種間雜交對雜交結(jié)實(shí)率的影響
        4.5.4 雜交時(shí)期與雜交結(jié)實(shí)率
    4.6 小結(jié)
5 雜交親本遺傳距離分析及雜交種真實(shí)性鑒定
    5.1 試驗(yàn)材料與藥品
        5.1.1 試驗(yàn)材料
        5.1.2 試驗(yàn)藥品
    5.2 試驗(yàn)方法
        5.2.1 DNA的提取與檢測
        5.2.2 SRAP引物
        5.2.3 SRAP-PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系及程序
        5.2.4 PCR產(chǎn)物檢測
    5.3 數(shù)據(jù)分析方法
    5.4 結(jié)果與分析
        5.4.1 12個(gè)雜交親本SRAP標(biāo)記圖譜分析
        5.4.2 12個(gè)苜蓿親本間的遺傳距離與聚類分析
        5.4.3 雜交種真實(shí)性的鑒定
        5.4.4 各雜交組合雜交種純度
        5.4.5 影響雜交種純度的主要因素
    5.5 討論
        5.5.1 苜蓿親本材料種質(zhì)遺傳多樣性與遺傳距離分析
        5.5.2 苜蓿雜交種分子標(biāo)記特異帶與純度鑒定
        5.5.3 影響雜交種純度的因素
    5.6 小結(jié)
6 不同倍性的雜種產(chǎn)量性狀優(yōu)勢分析
    6.1 試驗(yàn)材料
    6.2 試驗(yàn)方法
    6.3 數(shù)據(jù)分析方法
    6.4 結(jié)果與分析
        6.4.1 苜蓿親本材料的單株地上生物量比較
        6.4.2 苜蓿親本材料產(chǎn)量性狀表現(xiàn)
        6.4.3 育性和倍性對苜蓿親本材料產(chǎn)量性狀的影響
        6.4.4 雜交組合牧草產(chǎn)量優(yōu)勢表現(xiàn)
        6.4.5 苜蓿強(qiáng)優(yōu)勢雜交組合的篩選
        6.4.6 雜交組合牧草產(chǎn)量性狀的相關(guān)性
        6.4.7 不同倍性雜交組合牧草產(chǎn)量性狀表現(xiàn)
        6.4.8 不同倍性雜交組合牧草產(chǎn)量優(yōu)勢表現(xiàn)
        6.4.9 雜交組合牧草產(chǎn)量性狀優(yōu)勢與遺傳距離相關(guān)性
        6.4.10 親本倍性與遺傳距離對雜交組合牧草產(chǎn)量雜種優(yōu)勢的影響
    6.5 討論
        6.5.1 產(chǎn)量性狀對雜種優(yōu)勢形成的影響
        6.5.2 苜蓿強(qiáng)優(yōu)勢雜交組合的篩選
        6.5.3 倍性與雜交組合產(chǎn)量相關(guān)性狀優(yōu)勢形成的關(guān)系
        6.5.4 遺傳距離對雜交組合產(chǎn)量相關(guān)性狀優(yōu)勢形成的影響
        6.5.5 遺傳距離和倍性與雜交組合產(chǎn)量相關(guān)性狀優(yōu)勢形成的關(guān)系
    6.6 小結(jié)
7 全文討論
    7.1 苜蓿單倍體與雙單倍體獲得的影響因素
    7.2 苜蓿SRAP分子標(biāo)記特異帶與雜種優(yōu)勢相關(guān)性
    7.3 苜蓿種內(nèi)與種間雜交結(jié)實(shí)性的差異
8 結(jié)論
9 本研究創(chuàng)新
10 下一步研究設(shè)想
致謝
參考文獻(xiàn)
作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：3665082