水稻（Oryza sativa）是我國重要的糧食作物,提高水稻產量以及培育優(yōu)質品種對經濟發(fā)展和社會穩(wěn)定具有重要意義。葉片作為植物的六大器官之一,是植物進行光合作用的主要源器官,因而,調控葉片適時衰老將極大影響營養(yǎng)物質從葉片到種子的遷移過程。葉片衰老是在細胞、組織、器官等水平共同協調的復雜有序過程,對農作物產量以及品質影響極大。因此,研究葉片衰老的分子機制無疑對提高水稻產量具有重要理論和實踐意義。本研究以甲基磺酸乙酯（EMS）誘變水稻秈稻品種蜀恢獲得的早衰材料es2為研究對象,通過圖位克隆的方法分離得到基因ES2,并對其進行生理特征、生物信息學、基因功能研究。研究結果如下:1.突變體es2在三周左右開始出現類病斑,病斑隨著生長周期逐漸擴大,并伴隨整個生長周期;在營養(yǎng)生長后期,突變體表現出早于野生型衰老的現象;農藝性狀考察發(fā)現,突變體穗長變小、一級分枝與二級分枝數目減少。葉綠素含量分析表明突變體中葉綠素含量顯著低于野生型,而且在突變體葉片中出現死亡細胞。2.通過圖位克隆發(fā)現,突變體中ES2基因第二個外顯子缺失堿基135bp,導致45個氨基酸缺失,從而使蛋白功能發(fā)生變化。3.生物信息學分析表... 

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 植物衰老概述
        1.1.1 植物衰老的生理變化特征
        1.1.2 影響植物衰老的因素
        1.1.3 植物衰老假說
    1.2 高溫脅迫
        1.2.1 高溫脅迫概述
        1.2.2 植物受到高溫脅迫生理變化特征
    1.3 細胞色素P450
        1.3.1 細胞色素P450生理生化特征
        1.3.2 CYP450生物學功能
    1.4 本研究的目的與意義
第二章 突變體es2的表型及生理分析
    2.1 實驗材料
        2.1.1 材料
        2.1.2 試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 實驗材料的種植
        2.2.2 突變體es2的表型以及農藝性狀考察
        2.2.3 葉綠素含量的測定
        2.2.4 突變體的細胞死亡檢測
    2.3 結果分析
        2.3.1 突變體es2形態(tài)特征分析
        2.3.2 野生型與突變體葉綠素含量的差異
        2.3.3 突變體細胞死亡檢測分析
    2.4 討論與小結
第三章 ES2基因的圖位克隆
    3.1 實驗材料
        3.1.1 材料
        3.1.2 試劑
    3.2 實驗方法
        3.2.1 DNA提取
        3.2.2 PCR分析
        3.2.3 RNA提取
        3.2.4 cDNA合成
        3.2.5 實時熒光定量PCR分析
        3.2.6 ES2基因定位以及候選基因的測序
    3.3 結果與分析
        3.3.1 ES2基因的初定位
        3.3.2 ES2基因的精細定位及候選基因的鑒定
    3.4 討論與小結
第四章 ES2蛋白的生物信息學分析
    4.1 實驗材料
    4.2 實驗方法
    4.3 結果與分析
        4.3.1 ES2蛋白結構分析
        4.3.2 ES2蛋白的理化性質分析
        4.3.3 ES2系統(tǒng)進化分析
        4.3.4 基因ES2啟動子生物信息分析
        4.3.5 ES2基因組織譜表達分析
    4.4 討論與小結
第五章 ES2基因功能分析
    5.1 實驗材料
        5.1.1 材料
        5.1.2 試劑
    5.2 實驗方法
        5.2.1 抗氧化酶活性的測定
        5.2.2 丙二醛MDA含量的測定
        5.2.3 組織染色
        5.2.4 熒光定量分析
        5.2.5 高溫處理野生型與es2突變體
        5.2.6 ES2基因過表達載體構建
    5.3 結果與分析
        5.3.1 抗氧化酶活性分析
        5.3.2 組織化學分析H_2O_2的積累
        5.3.3 野生型與突變體es2中丙二醛含量差異分析
        5.3.4 野生型與突變體中衰老基因差異表達分析
        5.3.5 ES2相關的基因在野生型與突變體es2中差異表達分析
        5.3.6 突變體es2的耐熱性分析
        5.3.7 ES2基因的過表達載體構建
    5.4 討論與小結
第六章 總結與展望
    6.1 工作總結
    6.2 展望
參考文獻


【參考文獻】：
期刊論文
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