丹參（Salvia miltiorrhiza Bunge）作為中藥材,藥用歷史悠久。其中屬于二萜化合物的丹參酮類物質(zhì)是丹參中的一類重要次級(jí)代謝產(chǎn)物,現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明,丹參酮類化合物具有很高的藥用價(jià)值。目前丹參酮類化合物的獲得主要依賴于從種植的丹參中進(jìn)行提取,通過毛狀根培養(yǎng)和微生物生產(chǎn)等方式還不能夠大規(guī)模生產(chǎn)。對(duì)植物中的相關(guān)基因進(jìn)行調(diào)節(jié),以提高次級(jí)代謝產(chǎn)物的含量,是一種常用的技術(shù)方法。在調(diào)控丹參酮代謝合成的相關(guān)基因中,3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶（3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase,HMGR）基因位于甲羥戊酸（Mevalonic acid,MVA）路徑的上游,SmGGPPS1、SmKSL1、SmCYP76AH1靠近于丹參酮代謝通路的下游,通過這些合酶基因的調(diào)節(jié)可以增加丹參酮化合物的含量。因此本文以用于入藥的紫花丹參為材料,根據(jù)美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心（National Center of Biotechnology Information,NCBI）數(shù)據(jù)庫(kù)中已知的的基因序列設(shè)計(jì)引物,對(duì)丹參酮代謝通路上重要合酶基因SmGG... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省211工程院校教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：91 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略表
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 丹參研究進(jìn)展
        1.1.2 丹參的種質(zhì)資源
        1.1.3 丹參化學(xué)成分及藥理作用
    1.2 丹參組織培養(yǎng)不同誘導(dǎo)階段激素使用情況
        1.2.1 丹參愈傷組織培養(yǎng)
        1.2.2 外植體芽叢誘導(dǎo)
        1.2.3 外植體生根培養(yǎng)基
        1.2.4 植物一步成苗激素配方
    1.3 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的丹參轉(zhuǎn)基因研究進(jìn)展
        1.3.1 農(nóng)桿菌的菌種使用情況
        1.3.2 影響農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化效率的因素
    1.4 丹參酮化合物的代謝合成
    1.5 丹參化合物合成相關(guān)基因
        1.5.1 HMGR基因
        1.5.2 SmGGPPS1 基因
        1.5.3 SmKSL1 基因
        1.5.4 SmCYP76AH1 基因
    1.6 Bar抗除草劑基因研究
    1.7 本研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 丹參品種和無(wú)菌苗的獲取
        2.1.2 載體及菌株
    2.2 試劑與儀器
        2.2.1 主要試劑
        2.2.2 主要儀器
        2.2.3 培養(yǎng)基配方
    2.3 丹參組織培養(yǎng)體系的優(yōu)化
        2.3.1 丹參生根培養(yǎng)基的探究
        2.3.2 丹參一步成苗培養(yǎng)基的初步探究
    2.4 丹參有關(guān)基因的克隆和表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.4.1 丹參基因的獲取
    2.5 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的丹參遺傳轉(zhuǎn)化體系
        2.5.1 丹參遺傳轉(zhuǎn)化篩選抗生素濃度
        2.5.2 植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌 GV3101
        2.5.3 農(nóng)桿菌的侵染
3 結(jié)果與分析
    3.1 丹參組織培養(yǎng)體系的優(yōu)化
        3.1.1 丹參無(wú)菌苗的獲得
        3.1.2 丹參生根培養(yǎng)基的探究
        3.1.3 不同激素配比對(duì)丹參一步成苗的影響
    3.2 丹參有關(guān)基因的克隆和表達(dá)載體的構(gòu)建
    3.3 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的丹參遺傳轉(zhuǎn)化體系
    3.4 轉(zhuǎn)基因植株的獲得與檢測(cè)
        3.4.1 外植體遺傳轉(zhuǎn)化的試驗(yàn)過程
        3.4.2 轉(zhuǎn)基因植株的 PCR 檢測(cè)
4 討論
    4.1 丹參組織培養(yǎng)體系的優(yōu)化
        4.1.1 丹參生根培養(yǎng)基的探究
        4.1.2 丹參一步成苗培養(yǎng)基的初步探究
    4.2 丹參篩選抗生素濃度的確定
        4.2.1 草銨膦篩選濃度的選擇
        4.2.2 潮霉素篩選濃度的選擇
5 結(jié)論
    5.1 總結(jié)
    5.2 創(chuàng)新點(diǎn)
    5.3 展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]白花丹參和紫花丹參葉綠素?zé)晒馊兆兓容^研究[J]. 孫文帥,秦寧,王菲,張秀婷,衣凌飛,祝麗香.  特產(chǎn)研究. 2019(01)
[2]總丹參酮通過線粒體途徑誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞MCF-7凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 李虎業(yè),孔德元,竇增花,鄭科.  中藥材. 2019(01)
[3]丹參胚性愈傷組織的誘導(dǎo)和細(xì)胞大量培養(yǎng)體系的建立[J]. 汪海霞,劉艷軍,楊靜慧,張般般,桂毓,張景新.  天津農(nóng)林科技. 2018(06)
[4]丹參藥材道地性系統(tǒng)評(píng)價(jià)與分析[J]. 劉方舟,李園白,李萌,杜煜,楊陽(yáng).  遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào). 2019(01)
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[7]白芨無(wú)菌小苗一步成苗培養(yǎng)基優(yōu)化[J]. 鄒暉,李海明,王偉英,戴藝民,林江波.  黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(07)
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[9]植物3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶基因研究進(jìn)展[J]. 褚蔚,劉洋洋,李永波,楚秀生.  生物技術(shù)進(jìn)展. 2018(02)
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博士論文
[1]丹參酮合成關(guān)鍵基因SmCPS1與SmKSL1轉(zhuǎn)錄調(diào)控的研究[D]. 白朕卿.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2018
[2]丹參酚酸類成分生源合成調(diào)控相關(guān)基因的克隆與功能研究[D]. 張順倉(cāng).西北農(nóng)林科技大學(xué) 2014
[3]轉(zhuǎn)Bar基因抗除草劑稻谷對(duì)小鼠的安全性評(píng)價(jià)[D]. 劉金.湖南師范大學(xué) 2012
[4]丹參酮生物合成調(diào)控機(jī)理及丹參與絨毛鼠尾草cDNA-AFLP分析研究[D]. 楊東風(fēng).西北農(nóng)林科技大學(xué) 2012
[5]丹參牻牛兒基牻牛兒基焦磷酸合酶基因的克隆與功能研究[D]. 張蕾.中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 2009
[6]丹參種質(zhì)資源的遺傳多樣性研究[D]. 宋振巧.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008
[7]丹參酮類化合物生物合成相關(guān)酶基因克隆及功能研究[D]. 高偉.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院 2008

碩士論文
[1]利用SmPAL1基因調(diào)控丹參中丹酚酸合成[D]. 邱鏡仁.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[2]丹參轉(zhuǎn)錄因子SmLBD23和SmLBD16的克隆及功能研究[D]. 馮書超.陜西師范大學(xué) 2018
[3]藏丹參與紫花丹參中丹參酮和丹酚酸代謝差異研究[D]. 方譽(yù)民.浙江理工大學(xué) 2017
[4]基于丹參KSL基因“產(chǎn)地趨向變異”規(guī)律初步解析丹參道地性遺傳特征[D]. 王娟.北京中醫(yī)藥大學(xué) 2017
[5]丹參花藥培養(yǎng)及其葉肉細(xì)胞原生質(zhì)體的分離培養(yǎng)研究[D]. 常亞慧.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[6]除草劑在轉(zhuǎn)基因小麥篩選鑒定中的應(yīng)用研究[D]. 蔡陽(yáng)光.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2015
[7]SmJAZ3基因的克隆及JAZ調(diào)控丹參次生代謝的功能研究[D]. 晉鑫鑫.陜西師范大學(xué) 2015
[8]丹參迷迭香酸合酶基因（SmRAS）特異性沉默對(duì)酚酸類成分合成的影響[D]. 王仕英.陜西師范大學(xué) 2015
[9]丹參遺傳轉(zhuǎn)化體系的構(gòu)建及SmGGPPS和SmKSL的轉(zhuǎn)基因研究[D]. 成海寧.東北林業(yè)大學(xué) 2014
[10]丹參迷迭香酸合成途徑關(guān)鍵酶基因的鑒定與分析[D]. 侯學(xué)敏.山西師范大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3642068