丹參（Salviamiltiorrhiza Bunge）,多年生藥用草本植物,藥用成分為根和根莖,主要有效成分為丹酚酸類和丹參酮類次生代謝產(chǎn)物,被用于治療冠心病、腦血管疾病、神經(jīng)退行性疾病、失眠和骨質(zhì)流失等多種疾病。利用植物基因工程手段提高丹參中酚酸類或丹參酮類活性成分的含量是當前的研究熱點。已知茉莉酸及其衍生物可有效提高丹參中次生代謝產(chǎn)物的含量,茉莉酸信號途徑上的JAZ、MYC2等蛋白均參與次生代謝產(chǎn)物生物合成的調(diào)控。JAM（JASMONATE-ASSOCIATED MYC2-LIKE）蛋白屬于 bHLH 轉錄因子家族的 Ⅲd亞家族,是響應茉莉酸甲酯的負調(diào)節(jié)因子。已知,擬南芥bHLH轉錄因子Ⅲd亞家族成員JAM1、JAM2、JAM3與Ⅲe亞家族成員MYC2、MYC3、MYC4拮抗調(diào)控茉莉酸誘導的下游生物學反應。東北紅豆杉中,JAM蛋白TcJAMYC1,TcJAMYC2和TcJAMYC4負調(diào)控紫杉醇生物合成基因。在丹參中對JAM蛋白的研究未見報道,本實驗從丹參中克隆獲得了 bHLH轉錄因子Ⅲd亞家族基因SmbHLH53,對其次生代謝調(diào)控的功能進行了初步研究。本研究的主要內(nèi)容與結果如下:... 

【文章來源】：陜西師范大學陜西省211工程院校教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－２丹參中丹參酮的生物合成

?ｔｅｔｒｕｇｔｎｏｉ?ｍｄｌｉｒｏｎｅ??圖１－２丹參中丹參酮的生物合成。實線箭頭表示建立的關系，虛線箭頭表示假設的關系。ＩＰＰ：??異戊烯基焦磷酸，ＤＭＡＰＰ：二甲基烯丙基焦磷酸，ＩＰＩ：?ＩＰＰ異構酶，ＧＰＰ：香葉基二磷酸，ＧＰＰＳ：??ＧＰＰ合酶，ＦＰＰ：法尼基二磷酸，ＦＰＰＳ：?ＦＰＰ合成酶，ＧＧＰＰ：?ｇｅ牛兒基ｇｅ牛兒基二磷酸，ＧＧＰＰ??合酶，ＣＰＰ：?ｃｏｐａｌｙｌ二鱗酸酯，ＳｒｎＣＰＳ：?ＣＰＰ合酶，ＳｍＫＳＬ：金雀稀合成酶樣環(huán)化酶Ｕ。??Ｆｉｇ．?１－２?Ｂｉｏｓ＞ｎｔｈｅｔｈｓｉｓ?ｏｆ?ｌａｎｓｈｉｎｏｎｅｓ?ｉｎ?Ｓａｌｖｉａ?ｍＵｔｉｏｒｒｈｉｚａ．?Ｓｏｌｉｄ?ａｒｒｏｗｓ?ｉｎｄｉｃａｔｅ?ｔｈｅ?ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ??ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ，?ａｎｄ?ｄａｓｈｅｄ?ａｒｒｏｗｓ?ｉｎｄｉｃａｔｅ?ｈｙｐｏｔｈｅｔｉｃａｌ?ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ．?ＩＰＰ：?ｉｓｏｐｅｎｔｅｎｙｌ?ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ．??ＤＭＡＰＰ：?ｄｉｍｃｔｈｙｌａｌｌｙｌ?ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ，?１ＰＩ：?ＩＰＰ?ｉｓｏｍｃｒａｓｅ，?ＧＰＰ：?ｇｅｒａｎｙｌ?ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ，?ＧＰＰＳ：?ＧＰＰ??ｓｙｎｔｈａｓｅ．?ＦＰＰ：?ｆａｍｅｓｙｌ?ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ，?ＦＰＰＳ：?ＦＰＰ?ｓｙｎｔｈａｓｅ，?ＧＧＰＰ：?ｇｅｒａｎｙｌｇｅｒａｎｙｌ?ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ，??ＧＧＰＰＳ：?ＧＧＰＰ?ｓｙｎｔｈａｓｅ

?基因的克隆結果??通過ＰＣＲ技術，分別從ＤＮＡ和ｃＤＮＡ水平擴増獲得基因，結果??如圖２－１所示：ＤＮＡ和ｃＤＮＡ水平克隆所得片段大小均在１５００?ｂｐ至２０００?ｂｐ之間。??華大基因測序結果顯示．■?基因全長為１７９９?ｂｐ，包含１個丨１?ｂｐ的內(nèi)含??子，ｃＤＮＡ長度為１７８８?ｂｐ，編碼５９５個氨基酸殘基。??２０００?響?１??ｉＭＨＨ??ｌｏｏ?ＪＬ?ｗｙＪｆｅ：；?＾??■??圖２－１丹參加擴增產(chǎn)物凝膠電泳檢測??Ｍ：?ＤＬ２０００?ｍａｒｋｅｒ；?１：以?ｃＤＮＡ?為模板?的擴增產(chǎn)物；２：以?ＤＮＡ?為模板??的擴增產(chǎn)物；??Ｆｉｇ．?２－１?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ＳｍｂＨＬＨ５３．??Ｍ：?ＤＬ２０００?ｍａｒｋｅｒ；?１：?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｃＤＮＡ?ｆｒａｇｍｅｎｔ?ｏｆ?ＳｍｂＨＬＨ５３＼?２：?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ??ＤＮＡ?ｆｒａｇｍｅｎｔ?ｏｆ?ＳｍｂＨＬＨ５３．??２．３．２?ＳｍｂＨＬＨ５３生物信息學分析結果??ＰｒｏｔＰａｒａｍ在線預測ＳｍｂＨＬＨ５３蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)結果顯示ＳｍｂＨＬＨ５３蛋白??分子式為Ｃ２８４ＱＨ４５３５Ｎ８４５?０?８９５?Ｓ２７，相對分子質(zhì)量６５．７ｋＤ，理論等電點．７．５２，蛋白疏??１４??

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號：3625141