為探索烘干法替代液氮冷凍法研磨水稻葉片提取DNA的可行性,首先比較50℃低溫烘干法與液氮冷凍法研磨水稻葉片提取DNA的擴(kuò)增效果,然后進(jìn)一步分析不同溫度（50、60、70、80、90℃）烘干水稻葉片研磨提取DNA的擴(kuò)增效果,篩選最佳的烘干溫度。結(jié)果表明,水稻葉片在50～70℃下烘干磨碎所提取的DNA均能進(jìn)行有效擴(kuò)增,以50℃效果最佳,其與液氮冷凍法研磨葉片提取DNA的擴(kuò)增效果無(wú)明顯差異。水稻葉片烘干法具有操作簡(jiǎn)單、費(fèi)用低廉及實(shí)用性強(qiáng)等諸多優(yōu)點(diǎn),在DNA大量提取中可較好地替代液氮冷凍法對(duì)葉片進(jìn)行制備,具有一定的推廣應(yīng)用價(jià)值。 

【文章來(lái)源】：河南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2020,49(02)北大核心

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【部分圖文】：

烘干法磨樣情況

利用以上2種方法研磨葉片組織提取DNA,為了更好地對(duì)比擴(kuò)增效果,本研究使用了對(duì)DNA質(zhì)量要求較高的四引物擴(kuò)增受阻突變體系PCR技術(shù),使用的水稻材料為納雍五里香,PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳檢測(cè)圖譜見(jiàn)圖2。由圖2可知, 50 ℃烘干磨碎與液氮冷凍研磨水稻葉片提取的DNA均能有效擴(kuò)增出577、 257 bp 2條帶,且擴(kuò)增效果相當(dāng),表明50 ℃烘干磨碎與液氮冷凍研磨水稻葉片提取DNA的PCR擴(kuò)增效果無(wú)明顯差異,因此,50 ℃下烘干水稻葉片提取DNA方法切實(shí)可行。2.3 不同溫度烘烤水稻葉片提取DNA的擴(kuò)增效果分析

由圖3可知,60 ℃烘干水稻葉片提取的DNA(畢粳43)和70 ℃烘干水稻葉片提取的DNA(納雍五里香)均能進(jìn)行有效擴(kuò)增,兩者擴(kuò)增效果差異不明顯,但條帶亮度不及50 ℃烘干水稻葉片提取DNA的效果好,可能是由于溫度高導(dǎo)致DNA降解的緣故,而80 ℃和90 ℃烘干水稻葉片提取的DNA未能進(jìn)行有效擴(kuò)增。試驗(yàn)結(jié)果表明,在溫度不高于70 ℃的條件下對(duì)水稻葉片進(jìn)行烘干磨碎提取DNA,可用于常規(guī)PCR擴(kuò)增,以50 ℃最佳。3 結(jié)論與討論

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]云南地方品種子預(yù)44中一個(gè)新的抗稻瘟病基因的定位[J]. 卓曉軒,樊琳琳,安星宇,郭敬瑋,楊睿,曾千春,羅瓊.  中國(guó)水稻科學(xué). 2019(01)
[2]水稻耐鹽基因SKC1特異性分子標(biāo)記開(kāi)發(fā)及應(yīng)用[J]. 蔣醫(yī)蔚,韓曉麗,閘雯俊,劉凱,李培德,徐華山,游艾青,周雷.  分子植物育種. 2019(11)
[3]水稻抗褐飛虱基因Bph3特異性分子標(biāo)記開(kāi)發(fā)及應(yīng)用[J]. 鄧釗,石媛媛,趙新輝,秦鵬,劉開(kāi)雨,王凱,楊遠(yuǎn)柱.  分子植物育種. 2018(11)
[4]一種水稻高氮利用率NRT1.1B基因功能標(biāo)記的開(kāi)發(fā)與應(yīng)用[J]. 田孟祥,余本勛,張時(shí)龍,何友勛,吳瑞,田井平,葉永印.  分子植物育種. 2016(02)
[5]基于四引物擴(kuò)增受阻突變體系PCR快速鑒定水稻S5基因的秈粳屬性[J]. 田孟祥,張時(shí)龍,余本勛,何友勛,吳瑞,田井平,葉永印.  作物雜志. 2015(06)
[6]一種應(yīng)用PCR緩沖液快速制備水稻DNA模板的方法[J]. 田孟祥,張時(shí)龍,余本勛,何友勛,葉永印,李雪松.  分子植物育種. 2015(02)
[7]一種高效便捷的水稻DNA提取法及其應(yīng)用[J]. 趙國(guó)珍,賈育林,嚴(yán)宗卜,Christopher W DEREN,Melissa H JIA,戴陸園.  中國(guó)水稻科學(xué). 2012(04)
[8]一種簡(jiǎn)便快速的制備水稻基因組DNA PCR模板的方法[J]. 曹燕,王媛,齊進(jìn)煥,于力,劉秋云.  生物技術(shù). 2010(04)
[9]秈稻9311HR-T顯性高稈基因的初步定位[J]. 陳仁霄,張所兵,朱鎮(zhèn),趙凌,張亞?wèn)|,王才林.  江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2008(05)
[10]水稻早熟多子房突變體fon5的遺傳分析和基因定位[J]. 張向前,鄒金松,朱海濤,李曉燕,曾瑞珍.  遺傳. 2008(10)



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