【目的】通過CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)對(duì)水稻鋅指蛋白基因（OsC3H54）進(jìn)行基因編輯,篩選鑒定出其突變體植株,為深入研究OsC3H54的生物學(xué)功能提供良好材料,也為水稻鋅指蛋白研究提供參考依據(jù)�！痉椒ā客ㄟ^E-CRISP在Os C3H54基因的外顯子上設(shè)計(jì)靶點(diǎn)序列,將靶點(diǎn)序列連接至OsU6SK載體上,再與Cas9一起連接到pCAMBIA1300雙元載體上,獲得CRISPR/Cas9重組雙元載體,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)將其轉(zhuǎn)入日本晴水稻愈傷組織,利用潮霉素進(jìn)行抗性篩選,獲得突變體植株,并分析其靶點(diǎn)位置的堿基及編碼氨基酸突變情況�！窘Y(jié)果】在OsC3H54基因第2個(gè)外顯子上找到2個(gè)符合靶點(diǎn)設(shè)計(jì)要求的靶點(diǎn),分別為TG1:5’-CCGCCGCGGCTGCCTTTGGATAC-3’和TG2:5’-CCTTCCC CAATGGCGGGGGTGGC-3’。將OsU6SK載體和靶點(diǎn)序列正確連接的重組載體與Cas9一起連接至pCAMBIA1300雙載體上,成功獲得CRISPR/Cas9重組雙元載體（pCAMBIA1300-Cas9-TG1和pCAMBIA1300-Cas9-TG2）。通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)入日... 

【文章來源】：南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2020,51(11)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【部分圖文】：

Os C3H54基因結(jié)構(gòu)及基因編輯靶點(diǎn)

鋅指蛋白是一個(gè)龐大的蛋白家族，不同鋅指蛋白行使不同的功能，在植物抗病和非生物脅迫等方面具有重要作用。研究表明，鋅指蛋白不僅可與RNA結(jié)合發(fā)揮作用，還能與其他蛋白質(zhì)結(jié)合發(fā)揮功能。擬南芥中鋅指蛋白可識(shí)別植株體內(nèi)的RNA并與其結(jié)合調(diào)控植物的生長(zhǎng)發(fā)育，其中HUA1是細(xì)胞核中的C3H型鋅指RNA結(jié)合蛋白，在植株生長(zhǎng)發(fā)育過程中參與調(diào)控花的發(fā)育（Cheng et al.,2003）。鋅指蛋白也可與其他蛋白互作提高植株不同抗性，如棉花鋅指蛋白Gh ZFP1可與GZIRD21A和GZIPR5結(jié)合，提高轉(zhuǎn)基因煙草的耐鹽性和抗真菌性（Guo et al.,2009）。鋅指蛋白自身結(jié)構(gòu)也能影響植物的生長(zhǎng)發(fā)育，如鋅指蛋白Ⅶ亞家族中的KH結(jié)構(gòu)蛋白KHZ1和KHZ2能延緩擬南芥葉片衰老，調(diào)控植株延遲開花（Yan et al.,2017）。圖4 CRISPR/Cas9突變體植株潮霉素抗性基因PCR鑒定結(jié)果

CRISPR/Cas9突變體植株潮霉素抗性基因PCR鑒定結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]狗棗獼猴桃AkSAP蛋白的生物信息學(xué)分析[J]. 劉丹,李然紅,陳鑫,王立鳳.  河南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2019(12)
[2]水稻滯綠突變分子遺傳研究進(jìn)展[J]. 劉凱,嚴(yán)國(guó)紅,張桂云,孫明法.  江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2019(02)
[3]基于CRISPR/Cas9技術(shù)的水稻OsDUF1475突變體的創(chuàng)建與分析[J]. 孔曉聰,邳瑞雪,石雨鷺,王荃,靳亞軍,梁閃閃,張泗舉,欒維江.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2019(03)
[4]水稻鋅指蛋白基因OsZFP1的功能分析[J]. 李賀,韓藝娟,林藝娟,劉麗華,張承康,張連虎,王宗華,魯國(guó)東.  中國(guó)水稻科學(xué). 2015(02)
[5]水稻CCCH型鋅指蛋白亞家族Ⅰ基因的表達(dá)分析[J]. 劉小艷,孫艷俠,王亞男,劉曉楠,劉坤,郗冬梅.  山東農(nóng)業(yè)科學(xué). 2015(02)



本文編號(hào)：3465499