發(fā)布時間：2021-10-25 13:25

　　本研究通過對苧麻（Boehmeria nivea（L.）Gaud）高通量轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)的生物信息,獲得了苧麻香豆酸-3-羥化酶（BnC3H-1）基因cDNA序列,針對該序列設(shè)計特異引物,結(jié)合RT-PCR和RACE技術(shù)成功克隆出一個BnC3H-1基因cDNA的全長序列,命名為BnC3H-1,并提交Gen Bank,基因登錄號為KY078743。對BnC3H-1進行生物信息學(xué)分析表明,BnC3H-1基因cDNA序列全長為1940 bp,包含一個完整的開放讀碼框1536bp,5’UTR 96 bp,3’UTR 308 bp,其編碼推導(dǎo)蛋白質(zhì)含有511個氨基酸,相對分子量大小為57.8 kDa,理論等電點為8.61。利用BLAST在線分析,結(jié)果顯示該基因編碼蛋白具有Phe-x-x-Gly-x-Arg-x-Cys-x-Gly保守結(jié)構(gòu)域,這與其他物種C3H基因編碼蛋白的結(jié)構(gòu)域相同,均為P450 98A亞家族成員。RT-qPCR（Quantitative Real-time PCR）分析表明,BnC3H-1在苧麻不同時期的木質(zhì)部和韌皮部均有表達,在木質(zhì)部中表達相對較高。BnC3H-1在同一時期,不同... 

【文章來源】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

木質(zhì)素單體的生物合成途徑[15]

全處于沉默狀態(tài)而不轉(zhuǎn)錄。質(zhì)粒轉(zhuǎn)入到含有染色體 T7 RNA 啟動子的工程菌中，即可開始生產(chǎn)株是噬菌體 DE3 的溶源菌，噬菌體 DE3 是一種衍生的噬菌體，帶區(qū)和 lacI 基因，lacUV5 啟動子，以及 T7RNA 聚合酶基因（S1986;Novy and Morris,2001）。這一區(qū)段被插入 int 基因，因此，阻止噬菌體時整合到染色體上或從染色體切出。一旦形成 DE3 溶原狀態(tài) 誘導(dǎo)的 lacUV5 啟動子指導(dǎo) T7RNA 聚合酶基因開始轉(zhuǎn)錄，在溶原培G 誘導(dǎo) T7RNA 聚合酶生產(chǎn)，繼而質(zhì)粒上的目的 DNA 開始轉(zhuǎn)錄，產(chǎn)·Tag 是常用的純化蛋白的融合標(biāo)簽，特別是那些以包涵體形式表達的在完全變性的條件下溶解，繼而進行親和純化。pET-22b 載體含有 H核表達載體構(gòu)建和重組蛋白純化

圖 2-2 SMARTer 5’RACE 原理圖Fig 2-2 SMARTer 5’RACE illustrative diagram注：poly A+RNA：帶有 poly（A）尾的信使 RNASMARTer first-strand synthesis：第一鏈合成5’RACE-Ready cDNA：可以用于 5’RACE PCR 擴增的 cDNA5’RACE PCR：5’端擴增的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)First round of PCR：第一輪 PCR 擴增Incorporation of suppression PCR inverted repeat elements:－by Long Universal Primer：通過長的通用引物抑制 PCR 反向重復(fù)擴增Second round of PCR：第二輪 PCR 擴增Gene-specitic synthesis：基因的特異性合成Remaining rounds PCR Amplification of 5’fragment：通過兩輪擴增 5’片段In-Fusion homology 15bp sequence－added to the 5’-end of GSP1 for In-Fusion cloning：在 GSP1 的 5’端加入 15bp 的同源序列進行融合克隆

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]苧麻木質(zhì)素合成關(guān)鍵酶4CL和CCR基因cDNA序列的克隆與表達分析[D]. 唐映紅.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[2]苧麻性別分化相關(guān)基因的克隆、表達及遺傳轉(zhuǎn)化研究[D]. 薛麗君.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
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本文編號：3457490