鈣信號(hào)(Ca²⁺signaling)和NAD信號(hào)（NAD signaling）是生物體內(nèi)兩類重要的信號(hào)通路,其在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、能量代謝、逆境響應(yīng)和各種生物學(xué)過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵性的作用。鈣調(diào)蛋白（calmodulin,CaM）和NAD激酶（NAD kinase,NADK）是連接這兩個(gè)信號(hào)網(wǎng)絡(luò)的重要樞紐蛋白,許多研究表明CaM對(duì)NADK具有激活作用,但二者之間的互作關(guān)系及其生物學(xué)意義仍不明確。本研究采用生物信息學(xué)與分子生物學(xué)相結(jié)合的方法,對(duì)小麥TaNADK1和TaNADK2基因的基本功能進(jìn)行了探索,并初步證明了小麥CaM與NADK之間存在互作關(guān)系,取得具體的研究結(jié)果如下:1.通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù),對(duì)小麥TaNADK1和TaNADK2基因進(jìn)行了表達(dá)模式分析。組織表達(dá)模式結(jié)果表明這兩個(gè)基因具有明顯的組織表達(dá)特異性,TaNADK1主要在小麥的穗中表達(dá),而TaNADK2主要在小麥的葉與根中表達(dá);誘導(dǎo)表達(dá)模式結(jié)果顯示,TaNADK1和TaNADK2基因的表達(dá)均受到脫落酸（ABA）、茉莉酸甲酯（MeJA）、生長(zhǎng)素（IAA）及甲基紫精（MV）的誘導(dǎo)。此外,通過(guò)構(gòu)建TaNADK1/2... 

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CaM/CMLs及其靶蛋白在非生物脅迫下對(duì)植物細(xì)胞Ca2+信號(hào)的修飾和解釋

西北農(nóng)林科技大學(xué)碩士學(xué)位論文約 90 個(gè)氨基酸差異之外，均顯示出激酶活性。通過(guò)功能域分析，他K-2 的 N 末端有 CaMBD，而 SpNADK-1 沒(méi)有。實(shí)驗(yàn)體外顯示 SpNAM 依賴性 NADK，可以直接與 CaM 結(jié)合并被激活。與 SpNADK-2K-1 和人類的 NADK 雖然沒(méi)有 CaM 結(jié)合位點(diǎn)，但是 N-末端都具有磷酸化前關(guān)于肝臟中小鼠 NADK 磷酸化的研究 (Haas and Gygi, 2013)，以M 激活而使 NADK 磷酸化的激酶 CaMKII 的存在，Love 等人得出結(jié)論過(guò) Ca2+/CaM 依賴的方式磷酸化 NADK，并證明了這種機(jī)制 (Love et a2）。他們通過(guò)將 SpNADK-1 和 SpNADK-2 與 HeLa 細(xì)胞和[32P] ATP 一了一種有趣的現(xiàn)象，即只有 SpNADK-1 在 Ca2+/CaM 復(fù)合物存在時(shí)被磷還測(cè)定了磷酸敏感位點(diǎn)：SpNADK-1 的第 18 位絲氨酸和人 NADK 的第其中人 NADK 具有與小鼠 NADK 相同的磷酸化位點(diǎn)。該研究發(fā)現(xiàn)了 N 末端的磷酸化，不僅揭示了動(dòng)物中 CaM 對(duì) NADK 調(diào)節(jié)的分子機(jī)制，未發(fā)現(xiàn)的復(fù)雜 CaM 調(diào)控網(wǎng)絡(luò)提供了一個(gè)有意義的實(shí)例。

TaNADK2 特異性定量引物（TaNADK1/2-qPCR-F/R）和內(nèi)參引物（TaGAPDH-qPCR-F/R、TaActin-qPCR-F/R）序列見(jiàn)表 2-1：表 2-1 小麥 TaNADK1 和 TaNADK2 實(shí)時(shí)定量引物Table 2-1 Wheat TaNADK1 and TaNADK2 primers for qRT-PCR引物名稱Primer’s Name引物序列(5’-3’)Primer Sequences擴(kuò)增長(zhǎng)度（bp）amplified lengthTaNADK1-qPCR-F ACTTGACTGCCCTGCCTGAT183TaNADK1-qPCR-R CATAACGAACCGAACCAACACATaNADK2-qPCR-F ACCACCGACTTCCTCCGC160TaNADK2-qPCR-R CAAACAAATCCACGGGCGTaGAPDH-qPCR-F TTAGACTTGCGAAGCCAGCA78TaGAPDH-qPCR-R AAATGCCCTTGAGGTTTCCCTaActin-qPCR-F GAAGTGCTTTTGAAGAGTCGGT207TaActin-qPCR-R TTATTTCATACAGCAGGCAAGC引物合成于上海英俊 Invitrogen 技術(shù)服務(wù)有限公司。


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