水稻作為一種最主要的糧食作物哺育著全球近半數(shù)人口。分蘗數(shù)是水稻重要的農(nóng)藝性狀之一,分蘗對于水稻的產(chǎn)量構(gòu)成具有決定性作用,合適的分蘗能力是水稻理想株型育種的重要目標(biāo)。在前期研究中發(fā)現(xiàn)過表達(dá)LRK2轉(zhuǎn)基因株系提高了有效分蘗數(shù),同時顯著提高對干旱脅迫的耐/抗能力,另外,還發(fā)現(xiàn)LRK2能與真核翻譯延伸因子OsEF1A互作。為了分析LRK2下游互作基因OsEF1A的功能,將該基因通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)在水稻中過表達(dá),對過表達(dá)植株進(jìn)行功能的初步探討,并進(jìn)行組織特異性表達(dá)分析,這有助于我們對LRK2下游互作基因OsEF1A的功能進(jìn)行初步的了解。在本實驗中我們研究了過表達(dá)OsEF1A株系在各種逆境脅迫下的適應(yīng)性反應(yīng),來探索水稻中OsEF1A在逆境脅迫響應(yīng)中的生物學(xué)功能。另外,通過酵母雙雜交技術(shù)進(jìn)一步篩選LRK2與OsEF1A的互作蛋白區(qū)域,同時還篩選了其它能與LRK2互作的下游蛋白。本實驗為LRK2下游互作基因的功能初探提供了新的信息資源。具體研究結(jié)果如下:（1）利用生物統(tǒng)計學(xué)的方法,統(tǒng)計過表達(dá)OsEF1A株系的農(nóng)藝學(xué)性狀,包括有效分蘗數(shù)、株高和千粒重等。結(jié)果表明過表達(dá)OsEF1A顯著提高了有效分蘗數(shù);降低了... 

【文章來源】：浙江師范大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：92 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．丨純合株系的篩選??（Ａ）?Ｈｙｇ抗性篩選（左：純合株系，右：野生型株系）；（Ｂ）抗性培養(yǎng)基上根的生長．（左：純合??

結(jié)果分析??．１酵母雙雜交??將ＯｓＥＦｌＡ?￡個結(jié)構(gòu)域分開，構(gòu)建的多個載體分別包含其從Ｎ端到Ｃ端的１到２３０ａａ??（０ｓＥＦｌＡ－ＡＤ３－ｌ），２３１?到?３２０ａａ?（ＯｓＥＦｌＡ－ＡＤ３－２）?，?３２丨到?４４７ａａ?（０ｓＥＦｌＡ－Ｄ３－ｌ），??１?到?３２０ａａ?（ＯｓＥＦｌＡ－ＡＤ３－３），２３１?到?４４７ａａ?（ＯｓＥＦｌＡ－Ｄ３－２）。經(jīng)過酵母雙雜交發(fā)現(xiàn)，??ｓＥＦｌＡ中３２１到４４７ａａ（ＯｓＥＦｌＡ－Ｄ３－ｌ）的Ｃ端羧基域是與ＬＲＫ２Ｄ相互作用的直接區(qū)??，也是必要Ｋ域。??同時，通過實驗發(fā)現(xiàn)能與／ＡＫ２相互作用的另外兩個下游基因：負(fù)責(zé)編碼水稻超氧??物歧化酶（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ?Ｄｉｓｍｕｔａｓｅ，?ＳＯＤ）的基因以及負(fù)責(zé)編碼水稻Ｃ０Ｐ９信號??合體（Ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ?Ｐｈｏｔｏｍｏｒｐｈｏｇｅｎｉｃｓｉｇｎａｌｏｓｏｍｅ，ＣＳＮ）的基因?ｔｔｖｄＴＶｏ??Ａ?Ｂ??

為了探究ＬＲＫ２下游互作基因的在水稻中功能，利用??ｐ／Ｊ洲－２?ｘＪ５ｗＧＦ尸空載體構(gòu)建其過表達(dá)載體，以野生型Ｎｉｐ幼苗總ｃＤＮＡ為模板經(jīng)ＰＣＲ??得到（９Ｍ０Ｚ）、ａＣＭ的基因目的片段（如圖４．２Ｂ、Ｄ所示），構(gòu)建載體，經(jīng)酶切鑒定??（如圖４．２Ｃ、Ｅ所示）后測序，確定過表達(dá)載體構(gòu)建成功。??Ａ?ｐＪ３０〇ｘ３５ｓ：：ｅＧＦＰ?Ｖｅｃｔｏｒ??２？：３５Ｓ?ＯｓＳＯＤ?關(guān)??Ｊｘｉ５，Ｓ?；?ＯｓＣＳＮ??Ｂ?Ｍ?ＯｓＳＯＤ?Ｃ?Ｍ?ＣＫ?Ｕ?Ｄ?Ｄ??Ｄ?Ｍ?ＯｓＣＳＮ?Ｅ?Ｍ?ＣＫ?Ｕ?Ｄ?Ｄ??圖４．２?ＯｓＳＯＺ）、ＯｓＣ；Ｗ過表達(dá)栽體構(gòu)建??（Ａ）過表達(dá)載體示意圖；（Ｂ）?Ｏ＾ＯＤ的ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物；（Ｃ）?ｅＧＦＰ質(zhì)粒酶??切鑒定；（Ｄ）?０．？Ｃ幻Ｖ的ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物；（Ｅ）尸／卯０－２＞＜＿＾．．化（：：例．．．．ｅＧＦＰ質(zhì)粒酶切鑒定。Ｍ，?ＤＮＡ??分子量標(biāo)記；ＣＫ，陽性對照；Ｕ：未酶切的質(zhì)粒：Ｄ：酶切后的質(zhì)粒。??Ｆｉｇ?４．２?Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ?ｏｆ?ｏｖｅｒ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｖｅｃｔｏｒ?ｏｆ?ＯｓＳＯＤ?ａｎｄ?ＯｓＣＳＮ??（Ａ）?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｏｖｅｒ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｖｅｃｔｏｒ?ｏｆ?ＯｓＳＯＤ?ａｎｄ?ＯｓＣＳＮ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]水稻葉色突變基因的遺傳研究進(jìn)展[J]. 方希林,王悅,朱敏敏,鄧躍軍,張晶,李恩宇.  北方水稻. 2016(06)
[2]水稻葉色突變體812HS蛋白質(zhì)復(fù)合物和葉綠素合成特性的研究[J]. 蔣苑,劉莉,呂春芳,陳國祥,高志萍,呂川根.  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2016(10)
[3]水稻轉(zhuǎn)基因技術(shù)及新品種培育[J]. 葉榮建,林擁軍.  生命科學(xué). 2016(10)
[4]一個新的水稻黃綠葉突變體的遺傳分析及突變基因的精細(xì)定位[J]. 何旎清,柳周,張龍,白蘇陽,田云錄,江玲,萬建民.  作物學(xué)報. 2015(08)
[5]水稻單葉獨(dú)立轉(zhuǎn)綠型黃化突變體grc2的鑒定與基因精細(xì)定位[J]. 譚炎寧,孫學(xué)武,袁定陽,孫志忠,余東,何強(qiáng),段美娟,鄧華鳳,袁隆平.  作物學(xué)報. 2015(06)
[6]植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 駱翔,劉志頤,章樹民,申碩,王德福,王勁松.  中國農(nóng)學(xué)通報. 2014(15)
[7]真核翻譯延伸因子eEF1A功能研究進(jìn)展[J]. 高爽,查笑君,潘建偉.  浙江師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2013(04)
[8]RNA干擾及其在植物研究中的應(yīng)用[J]. 王婷婷,王丹丹,Rahman LaibiChelab,康丹,游騰飛,眭安平,楊星勇.  生物技術(shù)通報. 2013(03)
[9]一個水稻溫度敏感失綠突變體的遺傳分析及分子定位[J]. 董彥君,林冬枝,梅杰,蘇倩倩,張建輝,葉勝海,張小明.  分子植物育種. 2013(01)
[10]水稻葉色突變基因研究進(jìn)展[J]. 鄧曉娟,張海清,王悅,舒志芬,王國槐,王國梁.  雜交水稻. 2012(05)

碩士論文
[1]水稻新黃綠葉基因YGL9的鑒定和圖位克隆[D]. 張?zhí)烊?西南大學(xué) 2016
[2]擬南芥網(wǎng)格蛋白輕鏈的功能分析[D]. 王超.浙江師范大學(xué) 2012



本文編號：3452079