【目的】玉米是家禽和單胃動(dòng)物飼料的主要原料,但玉米籽粒中高活性的α-生育酚含量較低,且籽粒中的磷主要是以植酸磷的形式存在,動(dòng)物不能有效吸收利用,因此,飼料中需要添加化學(xué)合成的維生素E和無機(jī)磷或微生物來源的植酸酶以滿足動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育的需要,增加了飼料成本,同時(shí)又容易造成磷污染。通過轉(zhuǎn)基因獲得α-生育酚含量和植酸酶活性大量提高的玉米,為飼用玉米育種提供材料基礎(chǔ)。【方法】構(gòu)建含有3個(gè)基因表達(dá)盒的載體,采用農(nóng)桿菌侵染的方法轉(zhuǎn)化玉米,草銨膦作為篩選壓力;通過噴施草銨膦和PCR鑒定的方法篩選轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性植株,RT-PCR分析目的基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)情況;Western blot分析目的基因在翻譯水平上的表達(dá)情況,采用分光光度計(jì)測(cè)定轉(zhuǎn)基因玉米籽粒中的植酸酶活性,利用HPLC測(cè)定籽粒中的維生素E含量,同時(shí)比較轉(zhuǎn)基因株系與野生型在其他營(yíng)養(yǎng)成分和農(nóng)藝性狀上的差異。【結(jié)果】構(gòu)建了胚乳特異性啟動(dòng)子123387驅(qū)動(dòng)的植酸酶基因phyA2表達(dá)盒、胚特異性啟動(dòng)子13387驅(qū)動(dòng)的玉米γ-生育酚甲基轉(zhuǎn)移酶基因ZmTMT表達(dá)盒以及組成型啟動(dòng)子CaMV35S驅(qū)動(dòng)的草銨膦抗性基因Bar表達(dá)盒串聯(lián)的植物表達(dá)載體;轉(zhuǎn)化玉米獲得轉(zhuǎn)基因... 

【文章來源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2020,53(24)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：10 頁(yè)

【部分圖文】：

載體構(gòu)建示意圖

為了確定轉(zhuǎn)基因株系籽粒中phy A2、Zm TMT和Bar蛋白的表達(dá)情況，提取成熟籽粒的總蛋白進(jìn)行Western blot分析（圖3）。phy A2、Zm TMT和Bar蛋白在轉(zhuǎn)基因株系TPB1和TPB2的籽粒中均有表達(dá)。Zm TMT蛋白為玉米內(nèi)源蛋白，不但在轉(zhuǎn)基因株系有表達(dá)，在WT中也有表達(dá)，但在WT中的表達(dá)與在轉(zhuǎn)基因株系中的表達(dá)差異并不明顯，推測(cè)可能的原因是，Zm TMT是維生素E合成途徑中的關(guān)鍵酶，Zm TMT蛋白可能部分在發(fā)揮功能之后被降解；另外，用于陽(yáng)性對(duì)照的Zm TMT蛋白是原核表達(dá)的融合蛋白，大小約38 k D，而Zm TMT蛋白本身含有葉綠體定位信號(hào)肽，在植物體內(nèi)信號(hào)肽被去除之后其蛋白大小約為33k D，這也是Zm TMT的蛋白雜交條帶與陽(yáng)性對(duì)照有差異的原因（圖3-A）。Bar和phy A2蛋白均為外源蛋白，因此，2個(gè)蛋白只在轉(zhuǎn)基因株系TPB1和TPB2中有表達(dá)，而在WT中無表達(dá)（圖3-B和圖3-C）。圖3 成熟籽粒中phy A2、Zm TMT和Bar蛋白的Western blot分析

成熟籽粒中phy A2、Zm TMT和Bar蛋白的Western blot分析

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3449337