小麥（Triticum aestivum L.）是世界重要的糧食作物之一,其產量由畝穗數、穗粒數和千粒重決定,分枝（分蘗）是重要的農藝性狀之一,分蘗數在一定程度上決定了最終的畝穗數并進而影響單產。目前對小麥分蘗的研究大多集中在生理方面,對其發(fā)生的分子機理及調控方面的研究國內外報道很少。已有研究表明在水稻（Oryza sativa L.）中MOC1作為正調控因子具有起始和促進分蘗生長的功能。為理解小麥分蘗調控的分子機理,本研究分離了TaMOC1基因,并對其表達模式及功能進行了初步探究,具體結果如下:TaMOC1基因具有三對等位基因,定位于7號A、B、D染色體上。三對等位基因之間的序列同源性高達97.71%,其cDNAs全長分別為1290bp（TaMOC1-7A）、1281bp（TaMOC1-7B）和1278bp（TaMOC1-7D）,分別編碼430、427和426個氨基酸殘基組成的蛋白質。該基因gDNA僅含有1個外顯子。進化樹分析結果顯示TaMOC1-7B與大麥（Hordeum vulgare L.）中的LAS1具有較近的親緣關系,我們選取TaMOC1-7B為本研究的研究對象。瞬時表達實... 

【文章來源】：山東農業(yè)大學山東省

【文章頁數】：67 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 植物側枝發(fā)育的基礎
        1.1.1 AM的起始(以擬南芥為例)
            1.1.1.1 AM起始的調控因子
            1.1.1.2 植物激素調控AM起始
        1.1.2 腋芽的生長調控
            1.1.2.1 調控腋芽生長的作用因子
            1.1.2.2 激素間的相互影響調控腋芽的生長
        1.1.3 其他作用因子影響側枝的形成
            1.3.1.1 光信號與基因間的相互影響調控側枝的發(fā)育
            1.1.3.2 糖調控側枝發(fā)育
    1.2 禾本科植物分蘗的影響因素(以小麥為例)
        1.2.1 品種
        1.2.2 環(huán)境溫度
        1.2.3 土壤水分
        1.2.4 土壤養(yǎng)分
        1.2.5 光照
        1.2.6 播種期
        1.2.7 播種密度和播種深度
    1.3 GRAS家族基因在植物中的研究進展
        1.3.1 GRAS家族基因調控植物光信號轉導
        1.3.2 GRAS家族基因調控植物激素信號轉導
        1.3.3 GRAS家族基因調控植物的生長發(fā)育
            1.3.3.1 GRAS家族基因調控植物分生組織的發(fā)育
            1.3.3.2 GRAS家族基因調控根和莖的生長發(fā)育
        1.3.4 GRAS家族基因調控植物抵抗逆境脅迫過程
    1.4 大麥和小麥的分蘗突變體
    1.5 本研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 植物材料及其種植條件
        2.1.2 菌株與載體
        2.1.3 主要的酶及其它生化試劑、試劑盒
        2.1.4 主要儀器
        2.1.5 引物
        2.1.6 測序公司
        2.1.7 數據庫及分析軟件
    2.2 實驗方法
        2.2.1 植物組織總RNA的提取(試劑盒法)
        2.2.2 CTAB法提取小麥葉片總DNA
        2.2.3 反轉錄cDNA第一條鏈的合成(試劑盒法)
        2.2.4 配制培養(yǎng)基(每100mL的配置方法)
        2.2.5 制備大腸桿菌感受態(tài)細胞
        2.2.6 制備根癌農桿菌感受態(tài)細胞
        2.2.7 載體構建
            2.2.7.1 PCR擴增目的帶
            2.2.7.2 目的帶回收
            2.2.7.3 連接與轉化
            2.2.7.4 質粒DNA的提取
            2.2.7.5 凍融法轉化根癌農桿菌細胞
        2.2.8 雙酶切反應
        2.2.9 農桿菌介導的小麥幼胚的遺傳轉化
            2.2.9.1 RNAinterference(RNAi)及Overexpression(OX)表達載體的構建
            2.2.9.2 幼胚取材及共培養(yǎng)
            2.2.9.3 農桿菌侵染小麥幼胚愈傷
            2.2.9.4 篩選劑篩選抗性愈傷
            2.2.9.5 抗性愈傷的分化
            2.2.9.6 抗性苗的壯苗
            2.2.9.7 抗性苗的春化及種植
            2.2.9.8 陽性苗的鑒定
        2.2.10 進化樹分析
        2.2.11 亞細胞定位(原生質體法)
            2.2.11.1 構建35S::TaMOC1-GFP載體
            2.2.11.2 提取擬南芥葉片的原生質體
            2.2.11.3 載體瞬時轉化
            2.2.11.4 激光共聚焦顯微鏡對熒光信號的檢測
        2.2.12 轉基因小麥腋芽發(fā)育進程的組織切片分析
            2.2.12.1 固定包埋材料
            2.2.12.2 切片及烘干
            2.2.12.3 脫蠟復水、苯胺藍染色及封片
            2.2.12.4 顯微鏡下觀察切片
        2.2.13 地高辛標記的RNA原位雜交技術
            2.2.13.1 固定包埋組織材料(注意RNA操作)
            2.2.13.2 制備探針
            2.2.13.3 探針半定量
            2.2.13.4 組織材料切片及烘干
            2.2.13.5 脫蠟復水
            2.2.13.6 探針雜交
            2.2.13.7 雜交后處理
            2.2.13.8 顯微鏡觀察雜交信號
        2.2.14 TaMOC1-7A/7B/7D的分離
3 結果與分析
    3.1 TaMOC1的克隆
    3.2 TaMOC1蛋白定位于細胞核
    3.3 TaMOC1的表達模式分析
    3.4 TaMOC1的遺傳轉化
        3.4.1 除草劑篩選
        3.4.2 PCR鑒定
    3.5 轉基因株系的表型分析
        3.5.1 TaMOC1-RNAi轉基因小麥的表型分析
        3.5.2 TaMOC1-RNAi轉基因小麥的腋芽發(fā)育
4 討論
    4.1 TaMOC1是水稻MOC1的同源基因
    4.2 TaMOC1基因與小麥分蘗密切相關
    4.3 TaMOC1基因的表達影響小麥的分蘗
    4.4 TaMOC1基因的表達可能影響小麥的小穗發(fā)育
    4.5 TaMOC1的遺傳轉化
5 結論
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3447382