中藥丹參來源于唇形科多年生的草本藥用植物丹參Salvia miltiorrhiza Bunge的干燥根和根莖。廣泛分布于中國各地,種質(zhì)資源豐富。丹參藥用歷史悠久,始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,具有祛瘀止痛、通經(jīng)活血、清心除煩的功效,被用于治療心絞痛、月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)、瘀血腹痛等疾病。近年來研究發(fā)現(xiàn)其在保護(hù)心肌、擴(kuò)張血管、抗動脈粥樣硬化、抗血栓、保肝及抗菌消炎方面有明顯療效。丹參中主要有效成分是脂溶性的丹參酮類和水溶性酚酸類化合物,包括丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA、丹參酮ⅡB、隱丹參酮、丹參素、丹酚酸等。丹參酮類化合物是二萜醌結(jié)構(gòu),是類異戊二烯代謝途徑產(chǎn)生的,前體物質(zhì)是牻牛兒基牻牛兒基焦磷酸（Geranylgeranyldiphosphate,GGPP）,但其下游合成通路的很多基因的功能尚不清楚。因此,如何挖掘這些基因的功能非常重要。近年來,一種有效的基因敲除工具 CRISPR（clustered regulatory interspaced short palindromic repeats）/Cas9（CRISPR associated protein 9）的出現(xiàn),為基因功能研究提供了很大助力。它可以... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：博士

【圖文】：

圖１．丹參酮生物合成途徑（ＧＧＰＰ下游）??Ｆｉｇｕｒｅ?１?Ｔａｎｓｈｉｎｏｎｅｓ?ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ?ｐａｔｈｗａｙ?（ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ?ＧＧＰＰ）??

華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文??實驗的流程如圖２：??自交五代白花丹參無菌苗???Ｊ???以丹參酮途徑基因為對象???ｙ?［???設(shè)計靶點??構(gòu)建ＣＲＩＳＰＲ載體??轉(zhuǎn)化Ａｃｃｃｌ００６０發(fā)根農(nóng)桿菌?觀察表型????？??獲得游離轉(zhuǎn)基因毛狀根——提取ＤＮＡ鑒定突變體???１?！?無變化???化合物含量測定??？分析原因??，ｒ???推測基因功能??圖２．實驗流程圖??

生長條件??地為山東萊蕪的白花丹參為研宄材料。白花丹參作物研宄基地大棚，自然光照，白天溫度是２０－２５除地上部分，只保留地下部分（根系）。開花期早授粉后去除雄蕊并套袋。最終獲得自交五代的丹于ＭＳ無菌培養(yǎng)基中，置于培養(yǎng)室培養(yǎng)。培養(yǎng)室濕度８０％－９０％，光照為１６ｈ／８ｈ?（晝／夜）。??圖?３）、３５Ｓ－Ｃａｓ９－ＳＫ?（圖?４）以及?ｐＣａｍｂｉａｌ３００?（科學(xué)研究院的朱健康老師實驗室的張波濤博士惠

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]丹參酮類化合物生物合成相關(guān)酶基因克隆及功能研究[D]. 高偉.中國中醫(yī)科學(xué)院 2008



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