由于小麥生長(zhǎng)環(huán)境和采后儲(chǔ)藏等的影響,我國(guó)面粉的加工品質(zhì)并不能完全滿(mǎn)足我國(guó)面粉加工業(yè)的需求。通過(guò)添加面粉改良劑能改善面粉加工品質(zhì),以小麥內(nèi)源酶為主體的面粉改良酶制劑已成為面粉加工行業(yè)發(fā)展的重要方向。本文應(yīng)用原核和真核表達(dá)體系重組表達(dá)小麥過(guò)氧化氫酶（WCAT1）,在研究WCAT1酶學(xué)性質(zhì)基礎(chǔ)上,進(jìn)一步探討了WCAT1對(duì)面粉加工品質(zhì)的改善作用。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)論如下:（1）wcat1基因的克隆及生物信息學(xué)分析。從小麥黃化苗葉片中成功克隆了wcat1基因,測(cè)序后對(duì)wcat1基因及其編碼的蛋白質(zhì)進(jìn)行了生物信息學(xué)分析。wcat1基因含有1479個(gè)堿基,其編碼的WCAT1屬于過(guò)氧化氫血紅素結(jié)合蛋白質(zhì)超家族成員,是潛在的具有豐富的N-糖基化位點(diǎn)的親水性蛋白質(zhì),與同為禾本科的水稻、小米、高粱來(lái)源的CAT的親緣關(guān)系較近。（2）WCAT1的異源重組表達(dá)。利用大腸桿菌原核表達(dá)體系和畢赤酵母真核表達(dá)體系,實(shí)現(xiàn)了WCAT1在大腸桿菌和畢赤酵母中的異源重組表達(dá)。大腸桿菌表達(dá)的胞內(nèi)目的蛋白以不可溶的包涵體形式存在,畢赤酵母表達(dá)的胞外目的蛋白具有生物活性。以發(fā)酵液中WCAT1的酶活性為目標(biāo),優(yōu)化了畢赤酵母重組表達(dá)WCA... 

【文章來(lái)源】：華南理工大學(xué)廣東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：101 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 CAT的簡(jiǎn)介
    1.2 CAT的性質(zhì)
        1.2.1 CAT的來(lái)源及分類(lèi)
        1.2.2 CAT的類(lèi)型及特點(diǎn)
    1.3 CAT的研究現(xiàn)狀
        1.3.1 植物CAT的生理功能
        1.3.2 CAT的的應(yīng)用
        1.3.3 CAT的重組表達(dá)
        1.3.4 小麥過(guò)氧化氫酶的研究進(jìn)展
    1.4 影響面粉加工性能的因素
        1.4.1 小麥組分對(duì)面粉加工品質(zhì)的影響
        1.4.2 氧化劑對(duì)面粉加工品質(zhì)的影響
        1.4.3 酶對(duì)面粉加工品質(zhì)的影響
    1.5 本課題的研究意義和內(nèi)容
        1.5.1 研究意義
        1.5.2 研究?jī)?nèi)容
第二章 WCAT1在大腸桿菌中的表達(dá)
    2.1 前言
    2.2 實(shí)驗(yàn)儀器及材料
        2.2.1 菌株與質(zhì)粒
        2.2.2 儀器與設(shè)備
        2.2.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.4 常用試劑的配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 wcat1重組克隆載體的構(gòu)建
        2.3.2 生物信息學(xué)分析
        2.3.3 wcat1重組原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.3.4 重組大腸桿菌蛋白表達(dá)驗(yàn)證
        2.3.5 重組大腸桿菌表達(dá)條件的簡(jiǎn)單優(yōu)化
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 wcat1重組克隆載體的構(gòu)建
        2.4.2 WCAT1的生物信息學(xué)分析
        2.4.3 wcat1重組原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.4.4 重組大腸桿菌蛋白誘導(dǎo)表達(dá)結(jié)果
        2.4.5 重組大腸桿菌表達(dá)條件優(yōu)化
        2.4.6 討論
    2.5 本章小結(jié)
第三章 WCAT1在畢赤酵母中的表達(dá)
    3.1 前言
    3.2 實(shí)驗(yàn)儀器及材料
        3.2.1 菌株與質(zhì)粒
        3.2.2 儀器與設(shè)備
        3.2.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        3.2.4 常用試劑及培養(yǎng)基的配制
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 wcat1重組真核表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.3.2 WCAT1的表達(dá)及鑒定
        3.3.3 WCAT1的活性測(cè)定
        3.3.4 WCAT1的誘導(dǎo)表達(dá)條件優(yōu)化
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 wcat1重組真核表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.4.2 WCAT1·的表達(dá)及鑒定
        3.4.3 WCAT1的誘導(dǎo)表達(dá)條件優(yōu)化
    3.5 本章小結(jié)
第四章 WCAT1的純化及酶學(xué)性質(zhì)研究
    4.1 前言
    4.2 實(shí)驗(yàn)儀器及材料
        4.2.1 儀器與設(shè)備
        4.2.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        4.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑的配制
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 畢赤酵母重組WCAT1的分離純化
        4.3.2 WCAT1酶學(xué)性質(zhì)的研究
    4.4 結(jié)果與討論
        4.4.1 畢赤酵母重組WCAT1的分離純化
        4.4.2 WCAT1酶學(xué)性質(zhì)的研究
    4.5 本章小結(jié)
第五章 WCAT1對(duì)面粉加工品質(zhì)的影響
    5.1 前言
    5.2 實(shí)驗(yàn)儀器及材料
        5.2.1 儀器與設(shè)備
        5.2.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
    5.3 實(shí)驗(yàn)方法
        5.3.1 面粉粉質(zhì)測(cè)定
        5.3.2 面團(tuán)和面筋蛋白的制備
        5.3.3 面團(tuán)流變測(cè)定
        5.3.4 面包的焙烤以及品質(zhì)評(píng)價(jià)
        5.3.5 面包芯質(zhì)構(gòu)的測(cè)定
        5.3.6 小麥蛋白質(zhì)的提取及濃度測(cè)定
        5.3.7 面團(tuán)掃描電鏡的測(cè)定
    5.4 結(jié)果與討論
        5.4.1 WCAT1對(duì)面粉粉質(zhì)特性的影響
        5.4.2 WCAT1對(duì)面團(tuán)流變特性的影響
        5.4.3 WCAT1對(duì)面筋蛋白組成的影響
        5.4.4 WCAT1對(duì)面團(tuán)微觀結(jié)構(gòu)的影響
        5.4.5 WCAT1對(duì)面包品質(zhì)的影響
        5.4.6 討論
    5.5 本章小結(jié)
結(jié)論與展望
    一、結(jié)論
    二、研究創(chuàng)新點(diǎn)
    三、展望
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
附件


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]絲瓜過(guò)氧化氫酶（Catalase,CAT）酶學(xué)特性的研究[J]. 張前榮,莊尹宏,溫慶放,劉建汀,葉新如,陳敏氡,王彬,朱海生.  中國(guó)園藝文摘. 2017(09)
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[4]小麥粉品質(zhì)改良的方法[J]. 豆康寧,王富剛,楊寧寧,袁為玲.  糧食加工. 2016(01)
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碩士論文
[1]面食用酵母發(fā)酵特性對(duì)比研究[D]. 韓丹丹.河南工業(yè)大學(xué) 2014
[2]葡萄過(guò)氧化氫酶基因在畢赤酵母中的表達(dá)及酶學(xué)特性的初級(jí)研究[D]. 賈晨晨.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3437922