雄性不育是指植株雄蕊發(fā)育異常,不能產(chǎn)生有功能的花粉的現(xiàn)象,在生產(chǎn)中應(yīng)用這種特性可以降低種子生產(chǎn)成本并增加種子的遺傳純度。玉米雄性不育突變體K305ms由自交系K305經(jīng)60Co-y射線誘變獲得。前期研究發(fā)現(xiàn),該突變體遺傳穩(wěn)定,不育性狀由單隱性細(xì)胞核基因控制,并已將該不育基因ms305初步定位在染色體2L上。本研究通過設(shè)計特異性引物,分析ms305與ms32的同源關(guān)系;以K305ms和自交系156為親本,構(gòu)建大規(guī)模F2定位群體,開發(fā)加密標(biāo)記,利用SSR-BSA技術(shù)對目標(biāo)基因進行精細(xì)定位,預(yù)測ms305可能的候選基因。主要研究結(jié)果如下:1、通過查閱 Maize GDB（http://www.maizegdb.org/）和ms3 的相關(guān)文獻發(fā)現(xiàn),ms305在染色體位置上與已克隆的不育基因ms32距離相近。m32相對于野生型等位基因（GRMZM2G163233）缺失一個大于1.6kb的片段,該片段包括多個外顯子。因此,分段設(shè)計了覆蓋GRMZM2G163233全部外顯子的6對特異性引物。利用這些引物以K305、K305F和K305ms的DNA為模板進行擴增,擴增結(jié)果分別送生工生物工程（上海）股份... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２特異性引物在Ｋ３０５?（ＷＴ）、Ｋ３０５Ｆ和Ｋ３０５ｍｓ中的擴增結(jié)果??Ｆｉｇ．２?Ｔｈｅ?ａｍｐｌｉｆｉｅｄ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｐａｒｔｉｃｕｌａｒ?ｐｒｉｍｅｒｓ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ?ｏｆ?Ｋ３０５?（ＷＴ）、Ｋ３０５Ｆ??

己克隆的玉米細(xì)胞核雄性不育基因?qū)儆谌笔屯蛔�，缺失區(qū)段涵蓋其野生型??等位基因Ｇ７？ＭＺＭ２Ｇ／６Ｊ２＿Ｕ的第二和第三外顯子。而測序結(jié)果表明，Ｋ３０５ｍｓ、Ｋ３０５Ｆ??和Ｋ３０５外顯子的序列與的外顯子一致，無缺失（圖４）。??在Ｋ３０５ｍｓ中，Ｇ７？ＭＺＭ２Ｇ７（５３２ＪＪ與野生型基本一致，未發(fā)生突變，因此可以判??斷，ｗｓＪＯｉ與并非同一個等位基因。??－２１?－??

?ＴＴＧＧＴＣＣＴＴＧＧＴＧＧＴＣＡＴ?２．０８??將上述ＳＳＲ標(biāo)記在親本、Ｆｈ?Ｆ２基因池中進行驗證，部分電泳結(jié)果如圖５所示。??ｂｐ?Ｍ?ＰＩ?Ｐ２?Ｈ?Ｆ?Ｓ?ＰＩ?Ｐ２?Ｈ?Ｆ?Ｓ?ＰＩ?Ｐ２?Ｈ?Ｆ?Ｓ??ｂｎｌｇｌ?３１６?Ｍｓｓｒ２?ｕｍｃ２６０１??圖５?ＳＳＲ標(biāo)記ｂｎｌｇｌ３１６、Ｍｓｓｒ２、＿ｃ２６０１在各個群體中的擴增結(jié)果??Ｆｉｇ．５?Ｔｈｅ?ａｍｐｌｉｆｉｅｄ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ＳＳＲ?ｐｒｉｍｅｒ?ｕ?ｂｎｌｇｌ３１６、Ｍｓｓｒ２?ａｎｄ?ｕｍｃ２６０１?ｉｎ?ｔｈｅ?ｅａｃｈ?ｇｒｏｕｐ??Ｍ：分子量標(biāo)準(zhǔn)；；Ｐｈ可育親本；Ｐ２．？不育親本；Ｈ：?Ｆ１可育株；Ｆ：可育池；Ｓ：不育池。??Ｍ：?Ｍａｒｋｅｒ；?ＰＩ：?Ｆｅｒｔｉｌｅ?ｐａｒｅｎｔ；?Ｐ２：?Ｓｔｅｒｉｌｅ?ｐａｒｅｎｔ；?Ｈ：?Ｆｉ?Ｆｅｒｔｉｌｅ?ｐｌａｎｔ；??Ｆ：?Ｆｅｒｔｉｌｅ?ｐｏｏｌ；?Ｓ：?Ｓｔｅｒｉｌｅ?ｐｏｏｌ．??３．３．４不育基因連鎖分析??利用上述８對引物對Ｆ２群體中的８３０個不育單株分別進行ＰＣＲ擴增，擴增產(chǎn)物??用３％瓊脂糖凝膠電泳檢測，凝膠成像系統(tǒng)成像后進行條帶統(tǒng)計。把與母本不育株相??同的帶型計為ｂ，與父本相同的電泳帶型計為ａ，雜合體條帶計為ｈ，統(tǒng)計結(jié)果如下??表（表１４）。??－２８－??

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3436276