發(fā)布時間：2021-10-10 08:49

　　為了獲得高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的甘蔗原生質(zhì)體細胞,為獲得甘蔗原生質(zhì)體再生植株打下基礎,本研究以新臺糖22號ROC22和桂糖28號GT28幼葉為材料,研究了甘蔗原生質(zhì)體分離的影響因素、原生質(zhì)體培養(yǎng)程序及相關的技術環(huán)節(jié),對ROC22和GT28甘蔗原生質(zhì)體的分離、純化和培養(yǎng)條件進行優(yōu)化,研究結果表明:1.酶解前質(zhì)壁分離0.5h與質(zhì)壁分離0h相比:GT28和ROC22原生質(zhì)體的產(chǎn)量和活力分別增加了65.62%、2.08%和 105.94%、1.84%;2.在酶液組合0.5%果膠酶+2%纖維素酶+0.3%半纖維素酶+0.1%離析酶下,ROC22原生質(zhì)體的產(chǎn)量和活力最高,分別為:2.55×107個·g-1和98.54%;GT28原生質(zhì)體的產(chǎn)量和活力最高,分別為:2.05×107個·g-1和99.83%;3.不同酶解時間對原生質(zhì)體產(chǎn)量影響差異顯著,在酶解10 h時,ROC22和GT28原生質(zhì)體的產(chǎn)量分別比酶解5 h時增加了 35.4%和89.81%,酶解10 h最適合甘蔗原生質(zhì)體的分離;4.甘蔗原生質(zhì)體純化最適合的離心速率是800 rpm,GT28和ROC22原生質(zhì)體的產(chǎn)量達到最高,分別為2.1×107個·g-1... 

【文章來源】：廣西大學廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１原生質(zhì)體的三種培養(yǎng)方式??Ｆｉｇ．?２－１?Ｔｈｒｅｅ?ｍｅｔｈｏｄｓ?ｏｆ?ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ?ｃｕｌｔｕｒｅ??

ｅｎｚｙｍａｔｉｃ?ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ；?Ｌ．?Ｈｏｍｏｇｅｎｉｚａｔｉｏｎ??在加入１３％ＣＰＷ質(zhì)壁分離時，因１３％ＣＰＷ濃度較高，材料漂浮在液面之上（圖??３－１－Ｇ），在質(zhì)壁分離０．５ｈ后，材料有的下沉至管底（圖３－１－Ｈ），此時材料比質(zhì)壁分??離前要松軟（圖３－１－１），在加入酶液后，材料都沉至管底（圖３－１－Ｊ），酶解１０?ｈ后，??材料非常松散（圖３－１－Ｋ），輕輕吹打就可以將材料打成均勻的糊狀，此時原生質(zhì)體的??酶解完成。??３．２原生質(zhì)體純化體系的構建??在原生質(zhì)體的純化過程中，將剛酶解完的原生質(zhì)體（圖３－２－Ａ）先用細胞篩（圖３－??２－Ｂ、Ｃ）去除大的沒有酶解掉的組織，細胞篩過濾后原生質(zhì)體濾液是非常均勻地液??體，沒有肉眼可見的組織塊（圖３－２－Ｄ），離心后，原生質(zhì)體沉在管底（圖３－２－Ｆ），??打勻后，可見原生質(zhì)體液顏色偏淡褐色（圖３－２－Ｇ），在顯微鏡下可以看到邊緣清晰，??大小均勻

廣西大學碩士學位論文?甘鹿原生質(zhì)休分商與培養(yǎng)體系的延立和優(yōu)化??圖３－３甘蔗原生質(zhì)體培養(yǎng)體系的構建??Ｆｉｇ．３－３?Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ?ｃｕｌｔｕｒｅ?ｓｙｓｔｅｍ?ｏｆ?ｓｕｇａｒｃａｎｅ??注：Ａ．加入酶液１０?ｈ后；Ｂ．分離的原生質(zhì)體，ｂａｒ＝１０?ｊｉｍ；?Ｃ．有活力的原生質(zhì)體，ｂａｒ＝１０?ｐｍ；?Ｄ．??液體培養(yǎng)；Ｅ．光照培養(yǎng)箱；Ｆ．微滴培養(yǎng)；Ｇ．原生質(zhì)體第１次分裂；Ｈ．原生質(zhì)體第２次分裂；Ｉ．原??生質(zhì)體第３次分裂；Ｊ、Ｋ．小細胞團；Ｌ．小愈傷組織??Ｎｏｔｅ：?Ａ．?Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ?ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ?１０?ｈ；?Ｂ．?Ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔｓ，?ｂａｉ－１０?｝ｉｍ；?Ｃ．?Ｖｉａｂｌｅ?ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔｓ，?ｂａｒ＝１０?（ｉｍ；?Ｄ．??Ｌｉｑｕｉｄ?ｃｕｌｔｕｒｅ；?Ｅ．?Ｌｉｇｈｔ?ｉｎｃｕｂａｔｏｒ?；?Ｆ．?Ｍｉｃｒｏｄｒｏｐ?ｃｕｌｔｕｒｅ；?Ｇ．?Ｆｉｒｓｔ?ｄｉｖｉｓｉｏｎ?ｏｆ?ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ－ｄｅｒｉｖｅｄ?ｃｅｌｌ；?Ｈ．??Ｓｅｃｏｎｄ?ｄｉｖｉｓｉｏｎ?ｏｆ?ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ－ｄｅｒｉｖｅｄ?ｃｅｌｌ；?Ｉ．?Ｔｈｉｒｄ?ｄｉｖｉｓｉｏｎ?ｏｆ?ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ－ｄｅｒｉｖｅｄ?ｃｅｌｌ；Ｊ、Ｋ．?Ｃｅｌｌ?ｃｌｕｓｔｅｒ??ｆｏｍｉｅｄ?ｆｉ＇ｏｍ?ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ－ｄｅｒｉｖｅｄ?ｃｅｌｌ；?Ｌ．?Ｍｉｃｒｏｃａｌｌｉ?ｆｏｒｍｅｄ?ｆｒｏｍ?ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ－ｄｅｒｉｖｅｄ?ｃｅｌｌ??３．４原生質(zhì)體分離和純化體系的優(yōu)化??３．４．１不同酶液組合對甘蔗原生質(zhì)體產(chǎn)量的影響??


本文編號：3428051