抗蟲和耐除草劑玉米雙抗12-5是我國自主研發(fā)的轉(zhuǎn)基因品種,該品種于2020年1月21日獲得農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全證書,具有廣闊的應(yīng)用前景。轉(zhuǎn)化體特異性PCR方法是進(jìn)行轉(zhuǎn)基因生物安全監(jiān)管的最有效的技術(shù)手段之一,可以對轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品進(jìn)行身份鑒定。本研究組織8家實(shí)驗(yàn)室對研發(fā)單位提供的的雙抗12-5轉(zhuǎn)化體特異性定性、定量PCR方法進(jìn)行了驗(yàn)證,驗(yàn)證結(jié)果顯示定性與定量PCR檢測方法均具有穩(wěn)定性好、特異性強(qiáng)和靈敏度高的特點(diǎn),定量PCR方法能精確地定量檢測質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%和0.5%的雙抗12-5樣品,并且具有良好的重復(fù)性和再現(xiàn)性,符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的要求。本研究有助于后續(xù)標(biāo)準(zhǔn)方法的建立和完善,為我國轉(zhuǎn)基因生物安全監(jiān)管提供技術(shù)支撐和決策依據(jù)。 

【文章來源】：生物技術(shù)通報(bào). 2020,36(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

定性PCR和定量PCR引物位置示意圖

按照上述定性PCR反應(yīng)體系,用雙抗12-5轉(zhuǎn)化體特異性定性引物擴(kuò)增相應(yīng)的待測樣品。經(jīng)8家實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證結(jié)果顯示,在定性PCR方法特異性檢測中,所有實(shí)驗(yàn)室均從含有雙抗12-5樣品中擴(kuò)增出其轉(zhuǎn)化體特異性序列,且片段大小與預(yù)期一致,在其他轉(zhuǎn)基因玉米混樣、轉(zhuǎn)基因大豆混樣、轉(zhuǎn)基因棉花混樣、轉(zhuǎn)基因水稻混樣、轉(zhuǎn)基因油菜混樣、非轉(zhuǎn)基因玉米混樣和陰性樣品中均未擴(kuò)增出雙抗12-5轉(zhuǎn)化體特異性序列;在靈敏度檢測中,所有實(shí)驗(yàn)室均從質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的雙抗12-5樣品中擴(kuò)增出其轉(zhuǎn)化體特異性序列,且片段大小與預(yù)期一致,以3號實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果為例,見圖2。8家實(shí)驗(yàn)室具體驗(yàn)證結(jié)果見表4。綜上說明,研發(fā)單位提供的轉(zhuǎn)基因玉米雙抗12-5轉(zhuǎn)化體特異性定性PCR方法具有良好的特異性,檢測靈敏度達(dá)到0.1%。

將8家實(shí)驗(yàn)室提供的數(shù)據(jù)和結(jié)果進(jìn)行匯總分析,采用科克倫(Cochran)法和格拉布斯(Grubbs)法對測試結(jié)果進(jìn)行異常值檢驗(yàn),在實(shí)驗(yàn)室數(shù)量為8、置信區(qū)間為5%的條件下,科克倫檢驗(yàn)和格拉布斯檢驗(yàn)的臨界值分別為:0.680和2.126[8],分別計(jì)算8家實(shí)驗(yàn)室的科克倫統(tǒng)計(jì)量C值和格拉布斯統(tǒng)計(jì)量G值[8]。經(jīng)計(jì)算,5%質(zhì)量分?jǐn)?shù)樣品中1號實(shí)驗(yàn)室的G值和6號實(shí)驗(yàn)室的C值大于臨界值,為2組異常值,0.5%質(zhì)量分?jǐn)?shù)樣品無異常值。剔除異常值后,計(jì)算出每個(gè)實(shí)驗(yàn)室2份準(zhǔn)確性樣品的測量平均值,得出測量值與真值的偏差(Bias),6家實(shí)驗(yàn)室5%樣品測試值與真值的偏差的范圍在-8.30%-0.40%之間,8家實(shí)驗(yàn)室0.5%樣品測試值與真值的偏差的范圍在-10.0%-62.0%之間(見圖3)。綜合8家實(shí)驗(yàn)室中的有效數(shù)據(jù)計(jì)算5%和0.5%準(zhǔn)確性樣品的測量平均值分別為4.88%和0.61%,偏差分別為2.47%和21.38%,大多數(shù)的偏差主要是正值,具體數(shù)據(jù)見表7。質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%和0.5%的雙抗12-5樣品的偏差小于25%。驗(yàn)證結(jié)果表明,雙抗12-5定量方法能準(zhǔn)確地定量檢測質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%和0.5%的雙抗12-5樣品。2.2.4 重復(fù)性和再現(xiàn)性


本文編號：3409248