絞股藍(lán)（Gyostemma pentoaphyllun（Thunb.）Makino）屬于葫蘆科絞股藍(lán)屬多年生草質(zhì)藤本植物,其主要有效成分為絞股藍(lán)皂苷,在葉片中含量最高,目前分離鑒定的絞股藍(lán)皂苷已達(dá)160余種�，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明絞股藍(lán)皂苷具有抗腫瘤、抗焦慮、抗動(dòng)脈粥樣硬化、調(diào)節(jié)免疫力、降血糖、降血脂等多種藥理活性。絞股藍(lán)皂苷屬于三萜皂苷,因與人參皂苷具有相同或相似的化學(xué)結(jié)構(gòu)而備受關(guān)注。氧化鯊烯環(huán)化酶（OSCs）是絞股藍(lán)皂苷三萜骨架結(jié)構(gòu)合成的關(guān)鍵酶,本研究對(duì)絞股藍(lán)OSCs進(jìn)行了克隆和鑒定,為進(jìn)一步研究絞股藍(lán)皂苷的合成與調(diào)控奠定了基礎(chǔ)。植物信號(hào)分子茉莉酸甲酯（MeJA）可以誘導(dǎo)絞股藍(lán)皂苷上游合成途徑中的法尼基焦磷酸合酶（FPS）和鯊烯合酶（SS）基因上調(diào)表達(dá),因此,我們推測(cè)參與絞股藍(lán)皂苷合成的OSCs基因也可能受MeJA調(diào)控。對(duì)MeJA處理0h,6h,12h,24h的絞股藍(lán)葉的轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行了 Illumina測(cè)序,共獲取202,535,156條raw reads,采用denovo組裝共獲得82,073條unigenes。通過(guò)基因注釋和分類,發(fā)現(xiàn)在GO分析中,有22,662個(gè)unigenes得到... 

【文章來(lái)源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：96 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 轉(zhuǎn)錄組及轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)
        1.1.1 轉(zhuǎn)錄組
        1.1.2 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)
        1.1.3 絞股藍(lán)轉(zhuǎn)錄組研究進(jìn)展
    1.2 絞股藍(lán)皂苷合成途徑
        1.2.1 絞股藍(lán)的主要活性成分
        1.2.2 三萜皂苷的生物合成
        1.2.3 氧化鯊烯環(huán)化酶
    1.3 絞股藍(lán)轉(zhuǎn)錄組及途徑解析研究目的及意義
第二章 研究材料及方法
    2.1 材料、試劑與設(shè)備
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 試劑
        2.1.3 主要設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 cDNA的獲取
            2.2.1.1 樣品處理
            2.2.1.2 RNA提取及高通量測(cè)序
            2.2.1.3 反轉(zhuǎn)錄
        2.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.2.3 目的基因獲取
            2.2.3.1 引物設(shè)計(jì)
            2.2.3.2 候選OSCs基因擴(kuò)增
            2.2.3.3 PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠回收
            2.2.3.4 膠回收產(chǎn)物連接到T載體
            2.2.3.5 大腸桿菌轉(zhuǎn)化及陽(yáng)性克隆篩選
        2.2.4 目的基因連接到表達(dá)載體
            2.2.4.1 質(zhì)粒提取
            2.2.4.2 對(duì)目的基因添加酶切位點(diǎn)
            2.2.4.3 目的基因雙酶切連接到表達(dá)載體
        2.2.5 目的基因轉(zhuǎn)化釀酒酵母
        2.2.6 誘導(dǎo)目的基因表達(dá)
        2.2.7 產(chǎn)物提取及檢測(cè)
第三章 結(jié)果
    3.1 基于Illumina二代測(cè)序平臺(tái)的絞股藍(lán)轉(zhuǎn)錄組分析
        3.1.1 預(yù)處理及測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量評(píng)估
        3.1.2 轉(zhuǎn)錄本組裝
        3.1.3 基因功能注釋
        3.1.4 差異表達(dá)分析
    3.2 候選OSCs的獲取及生物信息學(xué)分析
        3.2.1 OSCs候選基因的篩選
        3.2.2 OSCs生物信息學(xué)分析
    3.3 OSCs的實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析
        3.3.1 OSCs在絞股藍(lán)不同部位的表達(dá)分析
        3.3.2 MeJA誘導(dǎo)不同時(shí)間的OSCs表達(dá)分析
    3.4 候選OSCs基因在酵母中表達(dá)及酶活性檢測(cè)
        3.4.1 表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.4.2 候選OSCs在酵母中的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.4.3 候選OSCs表達(dá)產(chǎn)物的檢測(cè)
第四章 討論
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
縮略詞
附錄
致謝
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]天然產(chǎn)物生物合成途徑解析策略[J]. 鄒麗秋,匡雪君,孫超,陳士林.  中國(guó)中藥雜志. 2016(22)
[2]Oxford Nanopore MinION Sequencing and Genome Assembly[J]. Hengyun Lu,Francesca Giordano,Zemin Ning.  Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2016(05)
[3]茉莉酸甲酯處理對(duì)何首烏根轉(zhuǎn)錄組的影響(英文)[J]. Hong-chang LIU,Wei WU,Kai HOU,Jun-wen CHEN,Zhi ZHAO.  Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine & Biotechnology）. 2015(12)
[4]De novo assembly and comparative analysis of root transcriptomes from different varieties of Panax ginseng C. A. Meyer grown in different environments[J]. ZHEN Gang,ZHANG Lei,DU YaNan,YU RenBo,LIU XinMin,CAO FangRui,CHANG Qi,DENG Xing Wang,XIA Mian,HE Hang.  Science China（Life Sciences）. 2015(11)
[5]PacBio Sequencing and Its Applications[J]. Anthony Rhoads,Kin Fai Au.  Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2015(05)
[6]Advances in Transcriptomic Studies and Ginsenoside Biosynthesis of American Ginseng[J]. Li-qiu Zou,Xue-jun Kuang,Chao Sun.  Chinese Herbal Medicines. 2015(02)
[7]基于高通量測(cè)序的紅豆杉EST-SSRs標(biāo)記研究[J]. 吳瓊,段小群,陳旭,肖培根.  中國(guó)中藥雜志. 2012(24)
[8]三萜皂苷生物合成途徑研究進(jìn)展[J]. 陳穎,孫海燕,曹銀萍.  中國(guó)野生植物資源. 2012(06)
[9]絞股藍(lán)化學(xué)成分與藥理作用研究概況[J]. 李杰,楊舟,詹琤琤.  湖北中醫(yī)雜志. 2012(10)
[10]絞股藍(lán)研究進(jìn)展[J]. 樸香蘭,吳倩.  時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥. 2010(07)

碩士論文
[1]長(zhǎng)春花轉(zhuǎn)錄組與萜類吲哚生物堿代謝途徑研究[D]. 朱孝軒.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2015
[2]羽扇豆醇對(duì)人肝癌細(xì)胞Wnt通路影響的研究[D]. 田孜博.河北醫(yī)科大學(xué) 2014
[3]Lupeol對(duì)肝細(xì)胞肝癌的抑制作用及其機(jī)制研究[D]. 劉芬.蘇州大學(xué) 2011



本文編號(hào)：3375499