三葉青（Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg）為被子植物門葡萄科崖爬藤屬,是我國(guó)獨(dú)有的珍稀藥用植物品種。主治小兒高熱、支氣管炎、肝炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及病毒性腦膜炎等多種疾病,也是一種常用的抗腫瘤藥物。由于三葉青的藥用價(jià)值高、人工栽培困難、需求量大,野生資源被過度開發(fā)導(dǎo)致其瀕臨滅絕。因此市場(chǎng)上出現(xiàn)了眾多的偽混品,因服用偽混品中毒的事件時(shí)有發(fā)生,嚴(yán)重影響了三葉青臨床療效及用藥安全性,而目前能有效鑒別三葉青的方法少之又少。DNA是生物體的遺傳信息載體,物種之間的DNA堿基序列不同是物種之間產(chǎn)生差異的根本原因。因此,依據(jù)DNA序列差異實(shí)現(xiàn)三葉青的真?zhèn)舞b定具有高度的準(zhǔn)確性。本論文通過比較三葉青真?zhèn)纹返腎TS2序列,得出三葉青區(qū)別于其它偽品的特異性序列,將獲得的特異性序列作為目標(biāo)序列,結(jié)合RCA技術(shù)分別建立了三種核酸傳感方法用于快速鑒別三葉青真?zhèn)窝芯�。本論文分為四個(gè)章節(jié),具體內(nèi)容及研究結(jié)果如下所示:第一章,主要對(duì)三葉青的研究進(jìn)展、三葉青鑒定技術(shù)及核酸探針技術(shù)做一個(gè)系統(tǒng)論述,并提出了本論文的主要研究?jī)?nèi)容、研究意義和目的。第二章,以目標(biāo)序列為自引物,結(jié)合RCA技術(shù)構(gòu)... 

【文章來源】：福州大學(xué)福建省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－２鏈置換擴(kuò)增過程示意圖Ｉ１＃??

這一定程度上限制了它的應(yīng)用。為滿足生物傳感器超靈敏的檢測(cè)需求，??科研人員在ＲＣＡ的基礎(chǔ)上又發(fā)展了其他技術(shù)，如超分支滾環(huán)擴(kuò)增（ＨＲＣＡ）和??多引物滾環(huán)擴(kuò)増（ＭＲＣＡ），使得其擴(kuò)增效率可達(dá)１０９倍以上。其原理如圖１－４??所示，ＨＲＣＡ則是在ＲＣＡ基礎(chǔ)上，增加了一條與環(huán)狀ｄｓＤＮＡ模板的部分序列??相同的ｄｓＤＮＡ引物，該引物與ＲＣＡ擴(kuò)增的產(chǎn)物進(jìn)行雜交并以其為模板進(jìn)行鏈??延伸和鏈置換，使得在很短的時(shí)間內(nèi)，即可得到一系列長(zhǎng)短不一的雙鏈ＤＮＡ。??基于ＨＲＣＡ技術(shù)的高靈敏特性，Ｊｉｎ等［１５２］建立了凝血酶的電致化學(xué)發(fā)光檢測(cè)技術(shù)，??使得凝血酶的檢測(cè)線低至１．２?ａＭ。??＜ｃ＞?痛?＾３??故＿二＂——‘二??（〇＞?—－．＇首——?１￣￣??（；：ｓ．?ＤＮＡ?ｐｏｌｙｍ＊ｒ？ｓ？?？?Ｆｏｒｗａｒｄ?ｐＨｍ？ｒ?－４１?Ｒｅｖｅｒｓｅ?ｐＨｍ？ｒ??圖１－４超分支滾環(huán)擴(kuò)增示意圖ｌ１４６ｌ??１６??

?－ｊ－ａｒａｅｔ?丨??圖１－３滾環(huán)擴(kuò)增示意圖??ＲＣＡ作為一種等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，具有簡(jiǎn)單、快速等優(yōu)點(diǎn)，但其擴(kuò)增效率僅為??１〇５倍，這一定程度上限制了它的應(yīng)用。為滿足生物傳感器超靈敏的檢測(cè)需求，??科研人員在ＲＣＡ的基礎(chǔ)上又發(fā)展了其他技術(shù)，如超分支滾環(huán)擴(kuò)增（ＨＲＣＡ）和??多引物滾環(huán)擴(kuò)増（ＭＲＣＡ），使得其擴(kuò)增效率可達(dá)１０９倍以上。其原理如圖１－４??所示，ＨＲＣＡ則是在ＲＣＡ基礎(chǔ)上，增加了一條與環(huán)狀ｄｓＤＮＡ模板的部分序列??相同的ｄｓＤＮＡ引物，該引物與ＲＣＡ擴(kuò)增的產(chǎn)物進(jìn)行雜交并以其為模板進(jìn)行鏈??延伸和鏈置換，使得在很短的時(shí)間內(nèi)，即可得到一系列長(zhǎng)短不一的雙鏈ＤＮＡ。??基于ＨＲＣＡ技術(shù)的高靈敏特性

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]植物DNA條形碼技術(shù)的應(yīng)用分析[J]. 周文瑾.  技術(shù)與市場(chǎng). 2016(11)
[2]基于ITS2序列的紫草PCR-RFLP鑒別研究[J]. 李謙,劉杰,過立農(nóng),鄭健,馬雙成.  藥物分析雜志. 2016(09)
[3]分子鑒定技術(shù)在中藥中的應(yīng)用[J]. 時(shí)圣明,潘明佳,王潔,陳常青.  中草藥. 2016(17)
[4]不同光照強(qiáng)度對(duì)林下栽培三葉青塊根產(chǎn)量及總黃酮含量的影響[J]. 付曉芳,鐘幼雄,劉順春,楊曉濱,周三女,黃云英.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2016(19)
[5]珍稀藥用植物三葉青種質(zhì)資源研究現(xiàn)狀[J]. 彭昕,吉慶勇,梁雅清,張煜炯,樓天靈.  中國(guó)現(xiàn)代中藥. 2016(08)
[6]中藥鑒定方法的研究進(jìn)展分析[J]. 堯冬梅,吳增光.  人人健康. 2016(12)
[7]三葉青水提取物對(duì)NK細(xì)胞殺傷胃癌BGC-823細(xì)胞的影響[J]. 袁雨,朱炳喜,劉軍權(quán),周燏,呂小婷,周忠海,陳永強(qiáng),楊陽.  胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志. 2016(06)
[8]紅外光譜法快速鑒別不同產(chǎn)地中藥黨參的研究[J]. 陳前鋒,侯鵬,劉巧,馬小婭,李攀,�；埒P.  西南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2016(06)
[9]近紅外光譜法測(cè)定三七中3種皂苷的總含量[J]. 閆珂巍,陳美君,梅國(guó)榮,王福,盧俊宇,陳鴻平,劉友平,陳林.  藥物分析雜志. 2016(04)
[10]薄層色譜與表面增強(qiáng)拉曼光譜聯(lián)用技術(shù)快速鑒別中藥黃連[J]. 陳艷瓊,郝勇,戚雪勇.  現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐. 2016(02)

碩士論文
[1]三葉青化學(xué)成分及抗腫瘤活性研究[D]. 陳麗蕓.福建中醫(yī)藥大學(xué) 2014
[2]三葉青的藥用價(jià)值與產(chǎn)業(yè)化前景研究[D]. 劉崟艷.福建農(nóng)林大學(xué) 2014
[3]基于DNAzyme及HCR信號(hào)放大的新方法研究[D]. 胡亞平.湖南大學(xué) 2013
[4]兩種藥用植物的化學(xué)成分及生物活性研究[D]. 郭曉江.山東大學(xué) 2013
[5]石猴子化學(xué)成分的研究[D]. 曾婷.贛南師范學(xué)院 2013
[6]中草藥XRD指紋圖譜方法學(xué)研究及中藥XRD指紋圖譜數(shù)據(jù)庫(kù)建立[D]. 高夏紅.四川大學(xué) 2005



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