油菜是我國最重要的油料作物之一,但近年來,由于生產(chǎn)成本的迅速增加以及與進口油料產(chǎn)品之間的競爭加劇,油菜的種植效益下滑,油菜產(chǎn)業(yè)陷入了發(fā)展瓶頸。種子中油脂的主要成分是甘油三酯（Triacylglycerol,TAG）,由甘油骨架和脂肪酸鏈兩部分組成,脂肪酸是其中可變的部分,脂肪酸的組成直接決定了油脂的理化性質(zhì)以及相應(yīng)的用途。通過對特定基因的遺傳調(diào)控,精準改良菜籽油的脂肪酸組成,以滿足不同工業(yè)領(lǐng)域和食品加工方式對油脂的不同需求,有助于提高油菜的綜合利用價值和經(jīng)濟效益。脂肪酸延伸酶1（FATTY ACID ELONGASE 1,FAE1）、脂肪酸去飽和酶2（FATTY ACID DESATURASE 2,FAD2）和脂肪酸去飽和酶3（FATTY ACID DESATURASE 3,FAD3）是調(diào)控油脂脂肪酸組成的3個關(guān)鍵酶,本研究以4個不同遺傳背景的油菜種質(zhì)作為受體材料,利用CRISPR-Cas9技術(shù)和種子特異性過表達技術(shù)對上述3個酶的編碼基因表達進行調(diào)控,同時結(jié)合傳統(tǒng)育種技術(shù),從而實現(xiàn)降低高芥酸（C22:1）菜籽油中的芥酸含量、進一步提高高芥酸菜籽油中的芥酸含量、提高雙低菜籽油中的油酸（C... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

油料種子中的脂質(zhì)生物合成(BaudandLepiniec2010)

本研究的技術(shù)路線

利用生物技術(shù)改良油菜種子芥酸、油酸和α-亞麻酸組成21（6）將測序結(jié)果與啟動子序列（見附錄2）進行比對，看是否存在堿基變異，如果比對結(jié)果完全吻合，再提取重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌GV3101中，并將部分菌種保存于-80℃冰箱。圖3pKSE401載體T-DNA區(qū)的物理圖譜(Xingetal2014)Fig.3PhysicalmapofT-DNAofpKSE410vector(Xingetal2014)2.3.7油菜遺傳轉(zhuǎn)化本研究中使用的油菜遺傳轉(zhuǎn)化體系及方法參照魯少平的研究結(jié)果(魯少平2013)，具體如下：（1）種子滅菌用75%的酒精浸泡種子1min，用無菌水將種子清洗1-2遍。再加入適量含有0.1%Tween-20的0.15%氯化汞溶液（保存于棕色避光瓶中），滅菌15-20min，視種子干凈程度而定，再用無菌水清洗4-5遍，然后將種子播種到M0培養(yǎng)基上，每皿（直徑為3cm）均勻播種18粒種子。將培養(yǎng)皿放到無菌發(fā)芽盒里，黑暗條件下25℃培養(yǎng)7d。（2）培養(yǎng)農(nóng)桿菌在侵染下胚軸的前兩天，用接種環(huán)蘸取含目的基因的農(nóng)桿菌保種菌液在相應(yīng)抗性的固體LB培養(yǎng)基上劃線，48h后挑取陽性單菌落接種到相應(yīng)抗性的液體LB培養(yǎng)基中，在28℃搖床中振蕩培養(yǎng)。（3）侵染下胚軸通過分光光度計測量菌液的OD600值，當(dāng)達到0.6-0.8時將培養(yǎng)好的菌液以6000r/min離心10min，倒掉上清，用等體積的DM（DilutionMedium）液體培養(yǎng)基洗滌兩次，棄上清，再用等體積的DM液體培養(yǎng)基重懸備用。將菌液與DM液體培養(yǎng)基以1:10的比例混合。用無菌的鑷子和解剖刀切取暗光培養(yǎng)的幼苗下胚軸，并切成0.8-1cm的外植體，保持切口整齊。將切好的外植體浸泡在已配置好的菌液中，侵染20-30min，視菌液濃度而定，期間用移液器吸打4-5次，使切口與菌液充分接觸。

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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[3]利用基因工程技術(shù)培育低芥酸油菜的研究[D]. 吳磊.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2014
[4]甘藍型油菜轉(zhuǎn)磷脂酶D（PLD）基因在干旱及氮響應(yīng)中的作用及應(yīng)用[D]. 魯少平.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013



本文編號：3373193