小麥?zhǔn)鞘澜缟献钪匾募Z食作物之一,高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)是小麥育種的重要目標(biāo)。干旱是限制小麥生產(chǎn)的最嚴(yán)重的非生物脅迫因素,核氧還蛋白（Nucleoredoxin,NRX）與小麥的抗旱性相關(guān);色澤是小麥面制品評價重要指標(biāo)之一,脂肪氧化酶（Lipoxygenase,LOX）活性與小麥面制品品質(zhì)密切相關(guān)。研究小麥抗旱和面制品色澤相關(guān)的基因,可為高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)小麥新品種選育奠定基礎(chǔ)。本研究選用干旱耐受型小麥品種晉麥47為材料,采用比較基因組學(xué)的方法,獲得了普通小麥硫氧還蛋白（Thioredoxin,TRX）超家族新成員NRX基因TaNRX1的3個部分同源基因的cDNA（complementary DNA,cDNA）和gDNA（genomic DNA,gDNA）序列,對該基因編碼蛋白的特征進(jìn)行分析并明確基因的結(jié)構(gòu),進(jìn)行響應(yīng)干旱脅迫表達(dá)分析,預(yù)測啟動子區(qū)域順式作用元件,并構(gòu)建植物過表達(dá)載體,為進(jìn)一步基因功能解析奠定基礎(chǔ)。利用SSR標(biāo)記Xwmc312和STS標(biāo)記LOX16和LOX18對180份寧夏小麥Q(jìng)Lpx.cass-1AL和TaLOX-B1位點(diǎn)的TaLOX基因組成進(jìn)行檢測與分析,為寧夏小麥品質(zhì)育種和生產(chǎn)提供理論依據(jù)... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同類型NRX的結(jié)構(gòu)域組成比較（引自Marchal等2014）

12普通小麥TaNRX1基因的克壟表達(dá)分析和載體構(gòu)建及寧夏小麥TaLOX基因的組成分析守區(qū)域設(shè)計反轉(zhuǎn)錄PCR（ReverseTranscriptionPCR,RT-PCR）同源引物。TaNRX1-cF:5′-AAGCGAAGGCACCGGATG-3′TaNRX1-cR:5′-CATCACACCACACAGCACAT-3′圖2-1電子拼接流程Figure2-1Theprocedureofinsilicosplicing2.1.8.2gDNA序列的引物設(shè)計為了獲得TaNRX1基因的gDNA序列，以該基因的cDNA序列為模板，利用PrimerPremier5.0軟件和Oligo7軟件及Primerdesigningtool（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast）在該基因的ORF之外設(shè)計PCR同源引物。TaNRX1-gF：5′-AAGCGAAGGCACCGGATG-3′TaNRX1-gR：5′-CAGCTGGCAAGGAACACACAC-3′2.1.8.3TaNRX1-2D基因的引物設(shè)計為了使TaNRX1基因能夠在生物體內(nèi)完整、準(zhǔn)確的表達(dá)，根據(jù)TaNRX1基因的3個部分同源基因cDNA序列間的差異，將下游引物設(shè)計在序列差異較大的3′-UTR，上游引物設(shè)計在5′-UTR，分離包含完整ORF的cDNA序列，由于3個部分同源基因cDNA序列的一致性很高，只設(shè)計出能夠分離D基因組序列的引物。TaNRX-cD-F5′-AAGCGAAGGCACCGGATG-3′TaNRX-cD-R5′-GCAAGGAACACACACAACGCC-3′（加粗加下劃線部分代表起始密碼子，其前面有15bp的堿基序列，不會改變ORF）2.1.8.4插入片段的引物設(shè)計根據(jù)表達(dá)載體的使用要求和包含完整ORF的特異基因TaNRX1-2D，設(shè)計引物如下：TaNRX-OE-cDF5′-tctagaggatccccg/ggtacc/AAGCGAAGGCACCGGATG-3′

第二章普通小麥TaNRX1基因的克壟表達(dá)分析和載體構(gòu)建1728S5S18S221bp5000bp750bp250bpM12圖2-2普通小麥總RNA的瓊脂糖凝膠電泳檢測結(jié)果Figure2-2TestresultsofagarosegelelectrophoresisofwheattotalRNA2.2.2cDNA使用cDNA直接電泳法和內(nèi)參引物擴(kuò)增法對反轉(zhuǎn)錄結(jié)果進(jìn)行檢測（圖2-3），電泳結(jié)果表明，分離到的cDNA呈現(xiàn)清晰的彌散狀條帶，EF-1α基因的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物條帶清晰，說明cDNA第一鏈合成成功，可用于后續(xù)試驗(yàn)。圖2-3普通小麥cDNA第一鏈的瓊脂糖凝膠電泳檢測結(jié)果M：Trans2kplusDNAMarker；1：cDNA；2：擴(kuò)增產(chǎn)物Figure2-3TestresultsofagarosegelelectrophoresisofwheatcDNAfirststrandM:Trans2kplusDNAMarker;1:cDNA;2:Amplificationproducts2.2.3TaNRX1cDNA本研究以課題組前期得到的1個核氧還蛋白的序列（GenBank登錄號AHL29285）為探針，在EnsemblPlants數(shù)據(jù)庫（http://plants.ensembl.org/index.html）進(jìn)行同源搜索，得到的3條序列中有2條不符合后續(xù)試驗(yàn)要求，以這2條序列為種子序列篩選小麥EST數(shù)據(jù)庫，各得到48條一致性較高的EST序列。利用DNAMAN8軟件進(jìn)行拼接，得到2條長度分別為1979和2007bp的序列。通過NCBI網(wǎng)站（http://www.ncbi.nlm.nih.gov）的ORFFinder程序（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gorf/gorf.html）對2條拼接序列和原本符合后續(xù)試驗(yàn)要求的序列進(jìn)行預(yù)測，得到3個長度分別為1731、1743和1734bp的


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