草酸廣泛分布于自然界,并在很多生物體內(nèi)有不同的生物學(xué)功能,它在植物抵抗生物脅迫和非生物脅迫中的重要作用尤受關(guān)注。最近在擬南芥中發(fā)現(xiàn)AAE3基因編碼草酰輔酶A合成酶（Os OCS）,證實(shí)該酶能以草酸作為特異性底物催化合成草酰CoA,并參與草酸代謝。本研究通過(guò)生物信息學(xué)分析,分子克隆,蛋白異源表達(dá)、生物化學(xué)與酶特性分析,構(gòu)建轉(zhuǎn)基因材料并對(duì)其進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及代謝物分析,研究了水稻OCS的分子、生化、酶學(xué)特性及生物學(xué)功能。主要研究結(jié)果如下:1.確定OsAAE3基因編碼的蛋白為水稻草酰輔酶A合成酶根據(jù)生物信息學(xué)分析,OsAAE3蛋白與擬南芥中OCS蛋白相似性高達(dá)70%。該蛋白經(jīng)大腸桿菌異源表達(dá),純化后大小約為56kDa,與擬南芥中的OCS蛋白大小相近,確定水稻中的OsAAE3為編碼其OCS的候選基因。生化與酶學(xué)特性分析顯示,OCS存在三種同工酶,其全酶分子量分別為110,221,276kDa左右,經(jīng)估算亞基數(shù)分別為二聚體、三聚體和四聚體。OsAAE3蛋白以草酸為特異性底物催化合成草酰CoA,草酸的K_m值為1.72mM;酶促反應(yīng)最適反應(yīng)pH為7.5;最適反應(yīng)溫度為38℃。上述... 

【文章來(lái)源】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)廣東省

【文章頁(yè)數(shù)】：128 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

AAE3基因保守性分析

蛋白質(zhì)巰基不僅能夠調(diào)節(jié)自身蛋白的結(jié)構(gòu)和功能，而且能夠根據(jù)氧化強(qiáng)弱迅速調(diào)整巰基不同氧化形態(tài)來(lái)響應(yīng)氧化還原脅迫。稻開(kāi)花相關(guān)基因及其調(diào)控機(jī)理研究進(jìn)展于開(kāi)花植物來(lái)說(shuō)，營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)到生殖生長(zhǎng)的轉(zhuǎn)換是一個(gè)極其重要的生命進(jìn)程于谷物類植物來(lái)說(shuō)，在一個(gè)最優(yōu)的時(shí)間點(diǎn)開(kāi)花可以確保產(chǎn)量的最大化。據(jù)表明，大部分的栽培水稻在短日照條件下開(kāi)花時(shí)間提前（早花），在長(zhǎng)日照花時(shí)間延后（晚花）。開(kāi)花的具體時(shí)間由一個(gè)錯(cuò)綜復(fù)雜的調(diào)控系統(tǒng)來(lái)調(diào)控(, 2015)（圖 1.3），除了圖中參與調(diào)控開(kāi)花時(shí)間的基因外，microRNA 和重塑子也參與調(diào)節(jié)水稻的開(kāi)花時(shí)間。

16圖 2.1 pCOLDIV 和 pET-30a 載體示意圖Fig2.1 The map of pCOLDIV vector and pET-30a vectorR 擴(kuò)增引物 OsAAE3 片段所用引物序列：引物：5'-GCGCGAGCTCATGGAGACCCCGACTCTGACCACG-3'SacI引物：5'-AGCGGATCCTTAATGATGATGATGATGATGCGCCTTGGTBamHI


本文編號(hào)：3293817