玉米是一種最重要的禾本科作物,它能夠?yàn)槿澜缣峁┘Z食、飼料及生物能源。但在玉米的生長發(fā)育過程中,會(huì)受到各種各樣的逆境脅迫,其中以干旱和鹽堿脅迫最為嚴(yán)重,最終影響玉米的產(chǎn)量。利用傳統(tǒng)育種的方法已經(jīng)獲得一些抗旱或者耐鹽的玉米新品種,但是傳統(tǒng)育種的方法比較耗時(shí)、耗力和耗錢。隨著生物技術(shù)的迅速發(fā)展,利用轉(zhuǎn)基因方法獲得抗旱或者耐鹽的玉米品種成為了一種可能。擬南芥的AtHDG11（HOMEODOMAIN GLABROUS11/ENHANCED DROUGHT TOLERANCE1）基因共10個(gè)外顯子,編碼723個(gè)氨基酸。該基因編碼著一個(gè)同源異形框-亮氨酸拉鏈類蛋白質(zhì),屬于HD-ZIP IV亞家族。前人已經(jīng)證明該基因能夠顯著提高擬南芥、煙草、牛尾草、水稻、棉花和小麥的耐旱性。本研究中,將該基因通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法轉(zhuǎn)入到玉米優(yōu)良自交系Z31中,并以鄭58為輪回親本進(jìn)行多代回交,得到BC₄F₄的材料;經(jīng)田間干旱實(shí)驗(yàn)得出:在干旱處理?xiàng)l件下雌雄穗開花間隔期（Anthesis-silking interval）并沒有發(fā)生顯著的變化;但是HS273、HS253、HS9... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

載體pCB2006-AtHDG11的示意圖

干旱處理：花期控水，即開花前 15 天開始進(jìn)行控水處理直至花期結(jié)束；正常處理：花期正常澆水。最后分別統(tǒng)計(jì)結(jié)穗率、單穗粒重、百粒重、水分。結(jié)穗率%=每個(gè)重復(fù)結(jié)穗的株數(shù)/每個(gè)重復(fù)的總株數(shù)×100 （注：10 粒以上的單穗算結(jié)實(shí)，10粒以下的算沒有結(jié)實(shí)）單穗粒重=每個(gè)重復(fù)的總粒重（g）/每個(gè)重復(fù)的總株數(shù)，最后根據(jù)水分矯正到 14%的重量百粒重：隨機(jī)數(shù) 100 粒種子的總重，每個(gè)重復(fù)數(shù)三次的平均數(shù)水分：谷物水分測量儀（PM-8188-A）測量2.2 結(jié)果與分析2.2.1 轉(zhuǎn) AtHDG11 基因玉米的 PCR 鑒定由本實(shí)驗(yàn)室前期獲得了9個(gè)獨(dú)立的轉(zhuǎn)基因事件，并且已經(jīng)與鄭58回交到了BC2F1代。對(duì)BC2F1代的每個(gè)轉(zhuǎn)基因幼苗及其后代進(jìn)行目的基因的檢測（圖 2.1）。結(jié)果表明，每個(gè)轉(zhuǎn)基因事件都擴(kuò)增到了 496 bp 的 DNA 片段，并且該片段的長度與含有目的基因的表達(dá)載體 pCU2006-AtHDG11 擴(kuò)增的產(chǎn)物大小一致。而 AtHDG11 為擬南芥的基因，并且在玉米種沒有發(fā)現(xiàn)其同源基因。該圖的結(jié)果與其一致，也沒有從對(duì)照鄭 58 中擴(kuò)增出 AtHDG11 基因。初步證明，AtHDG11 基因已經(jīng)成功地整合到了玉米的基因組中。

院碩士學(xué)位論文 第二章 轉(zhuǎn) AtHDG11 基因玉米 AtHDG11 基因玉米植株中 AtHDG11 基因轉(zhuǎn)錄水平的分轉(zhuǎn)基因事件和對(duì)照鄭 58 各取 30 株葉片混合磨樣，提取總 RNA，并反轉(zhuǎn)錄 為模板，以 AtHDG11 基因的特異性序列為引物，以玉米的 α-tubulin 基因株的陽性苗進(jìn)行RT-PCR和qPCR，來檢測各個(gè)事件中目的基因在轉(zhuǎn)錄水平的圖 2.2 和圖 2.3），每個(gè)轉(zhuǎn)基因事件都有該基因的表達(dá)，并且表達(dá)量各不相表達(dá)量相對(duì)增加 50-250 倍之多，而且對(duì)照鄭 58 中并沒有檢測到目的基因AtHDG11 基因已經(jīng)成功地整合到了玉米的基因組中，并且在玉米基因組中1 2 3 4 5 6 7 8 9 10


本文編號(hào)：3261409