要研究根瘤菌與土著菌的競爭及消長關(guān)系,或明確某一特定根瘤菌的占瘤率和結(jié)瘤率等,只有借助于標(biāo)記技術(shù)使目的菌具有示蹤特性,方能檢測,方便研究。為獲得紅色熒光蛋白質(zhì)粒RFP（Red flouoresent protein）、黃色熒光蛋白質(zhì)粒YFP（Yellow flouoresent protein）和綠色熒光蛋白質(zhì)粒GFP（Green flouoresent protein）能夠穩(wěn)定表達(dá)和傳代的根瘤菌標(biāo)記菌株,本研究采用以濾膜為載體的經(jīng)典三親本雜交方法,將不同顏色熒光蛋白RFP、YFP和GFP質(zhì)粒,成功導(dǎo)入輔助菌大腸桿菌中,以此為基礎(chǔ)進(jìn)行構(gòu)建和穩(wěn)定性驗證,并通過對熒光標(biāo)記菌分別接種于紫花苜蓿甘農(nóng)5號（Medicagosativa cv.Gannong No.5）和紫花苜蓿S.343（Medicagosativa cv.S.343）中,測定接種苜蓿幼苗的地上及地下部鮮重、干重,以及根長、株高、葉片數(shù)、葉面積、單株結(jié)瘤數(shù)、固氮酶活性、根瘤等級、占瘤率和葉片葉綠素含量等生長及生理指標(biāo),測試接種三種熒光標(biāo)記菌及其出發(fā)菌對苜蓿幼苗產(chǎn)生的影響,取得以下結(jié)果:1、眾多研究結(jié)果表明熱激轉(zhuǎn)化可以用于質(zhì)粒蛋白... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

紅、黃、綠三種顏色蛋白質(zhì)粒熱激轉(zhuǎn)化培養(yǎng)的單菌落Fig.1Red、yellowandgreenthreecolorsplasmidheatshockproteintransductionofsinglecolony

甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017 屆碩士學(xué)位論文表 2-2 不同溫度下紅、黃、綠三種蛋白質(zhì)粒 PCR 鑒定Fig.2-2 Identification of three kinds of plasmid protein PCR of red, yellow andgreen at different temperatures"+"指 PCR 鑒定清楚看見明顯很亮的單一條帶，"-"表示 PCR 鑒定不能看見明顯很亮的單一條帶。:"+" Refers to the PCR identification see obviously very bright single band, and"-"showed the PCR identification can'tlearly very bright single band.色不同溫度菌液 PCR 鑒定情況1 2 3 4 5 6 7 850℃52℃54℃56℃58℃60℃62℃64℃色質(zhì)粒 + + + _ _ _ _ /色質(zhì)粒 + _ _ _ _ _ _ /色質(zhì)粒 + + + + + + + +

TGAGTTTGTAACAGCTGCTGGGATTACACATGGCATGGATGAACTATACAAAAGGCCTGCAGCAAACGACGAAAACTACGCTGCAGGAGCTTAA2.3.4 紅、黃、綠三種不同顏色蛋白質(zhì)粒轉(zhuǎn)導(dǎo)的穩(wěn)定性三種不同顏色蛋白質(zhì)粒均用熒光顯微鏡壓片單菌落，觀察有無熒光，均能明顯的看到紅色、黃色和綠色的熒光(表 2-3)，如圖 3 所示，表明紅、黃、綠三種不同顏色蛋白質(zhì)粒已被成功導(dǎo)入大腸桿菌中，并均能穩(wěn)定表達(dá)。表 2-3 紅、黃、綠三種蛋白質(zhì)粒熒光顯微鏡下不同熒光情況Fig.3 Fluorescence spectra of three plasmid proteins of red, yellow and green underdifferent fluorescence conditions："+"指熒光顯微鏡下可以看到明顯的有顏色熒光，"-"表示熒光顯微鏡下不能看到明顯的有顏色熒光。ote: "+" means the fluorescent microscope can see clear color fluorescent, "-" said fluorescence microscope can't see clearly the colorf fluorescence.顏色 紅色蛋白質(zhì)粒 黃色蛋白質(zhì)粒 綠色蛋白質(zhì)粒熒光顯微鏡觀察熒光情況 + + +

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]根瘤菌在苜蓿植株體內(nèi)的運移及影響因素[D]. 張淑卿.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
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碩士論文
[1]大麥成熟胚離體培養(yǎng)條件的優(yōu)化及HgNHX1基因表達(dá)載體的構(gòu)建和遺傳轉(zhuǎn)化[D]. 馬玲瓏.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015



本文編號：3258329