[目的]本研究旨在發(fā)掘糖基轉(zhuǎn)移酶在水稻中的生物學(xué)功能,為明確其作用的分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。[方法]以糖基轉(zhuǎn)移酶（glycosyltransferase,GT,EC 2.4.x.y）GT43家族OsGT43B（Os03g0287800）基因T-DNA插入突變體osgt43b為材料,調(diào)查純合株系的主要農(nóng)藝性狀,利用分離株系分析性狀的遺傳模式;采用熒光定量PCR分析OsGT43B在水稻不同組織中表達(dá)特征;通過構(gòu)建重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化水稻原生質(zhì)體,分析OsGT43B及其上游調(diào)控因子OsKNOX在細(xì)胞中位置;采用雙分子熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)檢測(cè)OsKNOX在水稻原生質(zhì)體中的轉(zhuǎn)錄活性和對(duì)OsGT43B的調(diào)控作用。[結(jié)果]2個(gè)獨(dú)立的osgt43b突變體籽粒長(zhǎng)度、寬度、厚度、千粒質(zhì)量和糙米率顯著減小,其性狀變異由OsGT43B基因變異引起,為隱性突變;OsGT43B在水稻灌漿籽粒中高表達(dá),在穗和根中的表達(dá)次之,表達(dá)量隨穗發(fā)育和籽粒灌漿進(jìn)程逐漸提高;亞細(xì)胞定位結(jié)果顯示,OsGT43B-GFP融合蛋白在高爾基體中表達(dá),OsKNOX-GFP熒光位于細(xì)胞核中。轉(zhuǎn)錄活性分析結(jié)果顯示:OsKNOX具有轉(zhuǎn)錄激活功能,能激活OsG... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,43(02)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：10 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 植物材料鑒定、種植和性狀調(diào)查
    1.2 菌株、載體、試劑盒及引物
    1.3 DNA提取和突變體基因型鑒定
    1.4 OsGT43B組織表達(dá)分析
    1.5 OsGT43B亞細(xì)胞定位分析
    1.6 OsGT43B調(diào)控因子OsKNOX的功能分析
        1.6.1 OsKNOX亞細(xì)胞定位
        1.6.2 酵母體內(nèi)轉(zhuǎn)錄活性分析
        1.6.3 水稻原生質(zhì)體中的轉(zhuǎn)錄活性分析
        1.6.4 OsKNOX對(duì)OsGT43B的調(diào)控分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 T-DNA插入型突變體osgt43b的驗(yàn)證及農(nóng)藝性狀調(diào)查
        2.1.1 osgt43b突變體的PCR驗(yàn)證
        2.1.2 osgt43b突變體農(nóng)藝性狀調(diào)查
    2.2 OsGT43B基因在水稻中的組織表達(dá)特性
    2.3 OsGT43B及其調(diào)控因子OsKNOX的亞細(xì)胞定位
    2.4 OsKNOX轉(zhuǎn)錄活性分析
        2.4.1 OsKNOX在酵母細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)錄活性
        2.4.2 OsKNOX在水稻原生質(zhì)體內(nèi)的轉(zhuǎn)錄活性
        2.4.3 OsKNOX對(duì)OsGT43B的調(diào)控作用
3 討論



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