重要的糧食作物水稻是單子葉植物研究的模式植物,其花粉的正常發(fā)育與水稻的產(chǎn)量緊密相關(guān)。Argonaute（AGO）蛋白是廣泛存在于真核生物中的一類高度保守的蛋白家族,它是構(gòu)成RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體（RNA-induced silencing complex,RISC）的核心組分,也是參與RNA干擾途徑的關(guān)鍵因子。水稻（Oryza sativa L.）基因組編碼了19個AGO蛋白家族成員,而僅有個別基因的功能被揭示。其中,OsAGO18基因（Os07g0471300）位于水稻的第7染色體,其在水稻花粉發(fā)育中的功能尚未見研究報道。在實驗室的前期研究中,獲得了玉米Ubi啟動子驅(qū)動的OsAGO18的RNA干涉（RNA interference,RNAi）植株（OsAGO18-RNAi）。表型觀察發(fā)現(xiàn),OsAGO18-RNAi植株結(jié)實率和花粉育性明顯下調(diào),同一花藥中的1-2個藥室發(fā)育異常,部分花藥藥室的絨粘層降解延遲。以上結(jié)果暗示,OsAGO18下調(diào)表達影響了花藥的正常發(fā)育。為了深入探討OsAGO18調(diào)控水稻花粉發(fā)育的分子機制,本研究利用生物化學(xué)、分子生物學(xué)和細胞學(xué)等手段對OsAGO18基因在水稻... 

【文章來源】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
1 前言
    1.1 RNAi與Argonaute蛋白
    1.2 AGO蛋白的結(jié)構(gòu)和功能
        1.2.1 AGO蛋白的結(jié)構(gòu)
        1.2.2 AGO蛋白的功能
    1.3 AGO18蛋白的研究進展
        1.3.1 AGO蛋白與逆境脅迫
        1.3.2 AGO18蛋白與植物生殖發(fā)育
    1.4 研究目的及意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 本論文所用引物
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要設(shè)備
        2.1.5 主要試劑配方
    2.2 實驗方法
        2.2.1 水稻總RNA提取
        2.2.2 反轉(zhuǎn)錄
        2.2.3 qRT-PCR擴增
        2.2.4 水稻組織石蠟切片的制備
        2.2.5 RNA探針的制備與原位雜交
        2.2.6 水稻花粉育性及植株表型觀察
        2.2.7 水稻組織樹脂半薄切片的制備
        2.2.8 水稻花藥PCD（TUNEL）檢測
        2.2.9 GUS組織化學(xué)法檢測
3 結(jié)果與分析
    3.1 OsAGO18- RNAi植株的表型觀察
    3.2 OsAGO18 RN Ai植株的分子鑒定
    3.3 qRT-PCR檢測OsAGO18的時空表達模式
    3.4 GUS組織化學(xué)染色分析OsAGO18的表達
    3.5 原位雜交檢測OsAGO18在小穗中的時空表達特性
    3.6 OsAGO18-RNAi植株花藥發(fā)育過程的細胞學(xué)觀察
    3.7 OsAGO18-RNAi植株絨氈層PCD檢測
    3.8 OsAGO18-RNAi植株中AGO蛋白家族基因的表達
    3.9 OsAGO18-RNAi植株中與花粉發(fā)育相關(guān)基因的表達
4 討論
    4.1 OsAGO18參與調(diào)控了水稻花粉發(fā)育過程
    4.2 OsAGO18與花器官的極性發(fā)育
    4.3 OsAGO18參與調(diào)控水稻絨氈層發(fā)育和絨氈層PCD過程
致謝
參考文獻



本文編號：3181553