發(fā)布時間：2021-05-10 13:18

　　“兩系法”雜交水稻是水稻育種的發(fā)展方向,秈型溫敏核不育系是應(yīng)用最廣泛的兩系不育系類型。其育性主要受tms5基因控制。雜交粳稻相對雜交秈稻發(fā)展很慢,實用型不育系的缺乏是一個重要的原因。迄今兩系不育系的培育主要通過常規(guī)雜交選育,選育周期長且每一代都涉及低溫繁殖問題,并伴有連鎖累贅。因此,研究培育粳型兩系不育系的新技術(shù)具有重要意義�；蚪M編輯技術(shù)是新近建立并發(fā)展迅猛的現(xiàn)代分子技術(shù),能高效定向改良受體目的性狀基因。本研究利用CRISPR/Cas9基因組編輯技術(shù)敲除粳稻武津粳1號和L11B的溫敏核不育基因tms5,經(jīng)過1代繁育,結(jié)合分子鑒定,獲得了遺傳穩(wěn)定且不含轉(zhuǎn)基因的溫敏核不育系,證實利用CRISPR/Cas9技術(shù)是培育粳稻兩系不育系的高效新方法。本研究主要完成了以下工作:（1）構(gòu)建了tms5基因的CRISPR/Cas9載體;（2）利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化武津粳1號和L11B兩份開花習(xí)性較好的粳稻材料,分別獲得武津粳1號陽性轉(zhuǎn)化株16株,L11B的陽性轉(zhuǎn)化株16株;（3）對T₀代陽性轉(zhuǎn)基因植株進行tms5靶位點測序分析。T₀代植株中有16株在靶標(biāo)位點發(fā)生... 

【文章來源】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 文獻綜述
    1.1 兩系法雜交水稻及光溫敏不育系概論
        1.1.1 兩系法雜交水稻在我國生產(chǎn)應(yīng)用狀況及其優(yōu)點
        1.1.2 光溫敏核不育基因定位與克隆研究進展
        1.1.3 水稻溫敏核不育育性轉(zhuǎn)換的生理生化特性
        1.1.4 溫度對溫敏核不育系育性轉(zhuǎn)換的影響
        1.1.5 水稻光溫敏不育性改良研究的意義
    1.2 基因組編輯技術(shù)研究進展
        1.2.1 三種不同的基因組編輯技術(shù)
        1.2.2 CRISPR/Cas系統(tǒng)的由來
        1.2.3 CRISPR/Cas9 系統(tǒng)構(gòu)成和作用原理
        1.2.4 基因組編輯育種技術(shù)原理
        1.2.5 CRISPR/Cas9 基因組編輯技術(shù)在水稻分子育種上的應(yīng)用
    1.3 本研究的目的、意義和技術(shù)線路
        1.3.1 本研究的目的、意義
        1.3.2 技術(shù)線路
第2章 利用CRISPR/Cas9 技術(shù)編輯溫敏核不育基因
    2.1 實驗材料
        2.1.1 水稻材料
        2.1.2 菌株與載體
        2.1.3 主要試劑與培養(yǎng)基
        2.1.4 主要設(shè)備
        2.1.5 主要的引物序列
    2.2 實驗方法
        2.2.1 相關(guān)生物學(xué)實驗方法
        2.2.2 CRISPR/Cas9 植物表達載體的構(gòu)建
        2.2.3 農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化水稻武津粳1 號、L11B
        2.2.4 T_1 代純合突變單株的檢測
        2.2.5 T_1 代純合突變植株花粉育性檢測
        2.2.6 T_1 代純合突變植株主要農(nóng)藝性狀分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 CRISPR/Cas9 基因組編輯載體的構(gòu)建
        2.3.2 水稻材料遺傳轉(zhuǎn)化
        2.3.3 T_0 代轉(zhuǎn)基因植株分子檢測
        2.3.4 T_0 代轉(zhuǎn)基因植株的分子檢測分析結(jié)果
        2.3.5 T_1 代打靶位點純合突變單株的分子檢測
        2.3.6 T_1 代打靶位點純合突變單株溫敏不育性的初步測定
        2.3.7 T_1 代純合突變植株主要農(nóng)藝性狀考察
第3章 全文討論與總結(jié)
    3.1 全文討論
        3.1.1 利用基因編輯創(chuàng)制粳型兩系不育系可能存在的問題
        3.1.2 CRISPR/Cas9 技術(shù)在作物遺傳育種中的應(yīng)用前景
    3.2 全文總結(jié)
參考文獻
致謝
作者簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]水稻程序性細(xì)胞死亡相關(guān)基因的克隆和功能分析[D]. 蘇偉.復(fù)旦大學(xué) 2006



本文編號：3179432