水稻是我國最重要的糧食作物之一。為了保障我國糧食的安全供給,依靠大幅度提高水稻單產(chǎn)是有效的手段。目前,雜種優(yōu)勢利用與理想株型相結(jié)合的超高產(chǎn)育種被認(rèn)為是水稻產(chǎn)量水平發(fā)生再次飛躍的重要策略。直立穗是目前粳稻品種最重要的株型之一。直立穗株型形成的關(guān)鍵基因qPE9-1已經(jīng)被克隆,但其調(diào)控直立穗形成的分子機(jī)制還不清楚。在前期研究中,利用酵母雙雜交篩選出1個與qPE9-1互作的蛋白,命名為PIP1（qPE9-1 Interacting Protein 1）,屬于GASR（GibberellicAcid-stimulated transcript in rice）家族成員,并進(jìn)行了轉(zhuǎn)基因功能驗(yàn)證。本研究在此基礎(chǔ)上,繼續(xù)開展相關(guān)研究,為解析qPE9-1調(diào)控水稻直立穗株型的遺傳生理基礎(chǔ)提供信息。主要取得以下研究結(jié)果:1、構(gòu)建了包含著3個結(jié)構(gòu)域的部分qPE9-1蛋白的載體,分別包含Gγ結(jié)構(gòu)域,包含Gγ和TM結(jié)構(gòu)域,以及包含TM和Cys-rich結(jié)構(gòu)域,將其分別連入pGBKT7（BD）載體,與連入pGADT7（AD）的PIP1蛋白進(jìn)行酵母雙雜交分析。結(jié)果表明,PIP1蛋白不能與Gγ結(jié)構(gòu)域互作,但可以與C端的... 

【文章來源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
符號說明
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 直立穗研究進(jìn)展
        1.1.1 直立穗研究的重要性
        1.1.2 直立穗發(fā)展史
        1.1.3 直立穗的遺傳基礎(chǔ)
        1.1.4 直立穗研究的分子水平
    1.2 赤霉素的研究進(jìn)展
        1.2.1 赤霉素的合成
        1.2.2 赤霉素的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)
        1.2.3 赤霉素作用機(jī)理
            1.2.3.1 促進(jìn)細(xì)胞伸長
            1.2.3.2 促進(jìn)細(xì)胞分裂
    1.3 GAST研究進(jìn)展
        1.3.1 GAST蛋白的定位與功能
        1.3.2 GAST蛋白研究的展望
    1.4 本研究的目的和意義
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株和載體
        2.1.3 主要的實(shí)驗(yàn)設(shè)備
        2.1.4 常用分子生物學(xué)試劑和藥品配制
        2.1.5 引物的合成及測序
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料農(nóng)藝性狀考察
        2.2.2 RNA的提取
        2.2.3 RNA的反轉(zhuǎn)錄
        2.2.4 PCR反應(yīng)和電泳分析
        2.2.5 瓊脂糖凝膠中回收DNA片段
        2.2.6 RNAi載體的構(gòu)建
        2.2.7 質(zhì)粒的試劑盒提取
        2.2.8 定量PCR(Real-time PCR)分析
        2.2.9 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化
        2.2.10 農(nóng)桿菌電擊轉(zhuǎn)化
        2.2.11 根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)培育轉(zhuǎn)基因水稻
        2.2.12 DNA提取
    2.3 酵母雙雜驗(yàn)證qPE9-1與PIP1互作區(qū)域
    2.4 外源GA3處理對基因PIP1表達(dá)的影響
    2.5 外源GA3處理對PIP1 RNAi轉(zhuǎn)基因水稻表型的影響
    2.6 轉(zhuǎn)基因植株GA_4的含量測定
第三章 結(jié)果和分析
    3.1 PIP1與qPE9-1不同結(jié)構(gòu)域的互作分析
    3.2 PIP1 RNAi轉(zhuǎn)基因株系的鑒定和農(nóng)藝性狀調(diào)查
    3.3 PIP1參與調(diào)控水稻對赤霉素的響應(yīng)
    3.4 qPE9-1參與調(diào)控水稻對赤霉素的響應(yīng)
    3.5 PIP1與qPE9-1的表達(dá)受GA_3的誘導(dǎo)
    3.6 PIP1和qPE9-1轉(zhuǎn)基因株系中內(nèi)源GA_4含量測定
    3.7 PIP1、qPE9-1轉(zhuǎn)基因株系中GA_3合成和轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因的表達(dá)
    3.8 PIP1和qPE9-1基因CRISPR/Cas9突變體材料的創(chuàng)制
第四章 小結(jié)與討論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3166337