轉(zhuǎn)基因作物在全球范圍內(nèi)商業(yè)化種植已經(jīng)20多年了,隨著轉(zhuǎn)基因作物種植面積的增加,轉(zhuǎn)基因植物產(chǎn)品的生物安全問(wèn)題已成為人們關(guān)注焦點(diǎn)和爭(zhēng)論熱點(diǎn)。轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米是目前我國(guó)唯一獲得農(nóng)業(yè)部頒發(fā)的安全證書(shū)的轉(zhuǎn)基因玉米,可以提高動(dòng)物對(duì)磷的利用率,具有很大的潛在商業(yè)化種植市場(chǎng)。轉(zhuǎn)基因作物的監(jiān)管需要進(jìn)行安全性評(píng)價(jià),對(duì)轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米的安全性已經(jīng)采用多方面指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià),但還未見(jiàn)從蛋白質(zhì)組層面上對(duì)其進(jìn)行非預(yù)期影響的研究。本研究通過(guò)雙向電泳（2-DE）和高通量精準(zhǔn)定量比較蛋白質(zhì)組iTRAQ技術(shù),系統(tǒng)比較了轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米與非轉(zhuǎn)基因?qū)φ沼衩兹~片和種子的蛋白質(zhì)組差異,從蛋白質(zhì)表達(dá)水平對(duì)其非預(yù)期影響進(jìn)行了進(jìn)一步評(píng)價(jià),以期建立一套科學(xué)合理的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)體系,來(lái)檢測(cè)和評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)基因作物的非預(yù)期影響,為轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米以及其它轉(zhuǎn)基因作物的安全評(píng)價(jià)提供理論基礎(chǔ)和技術(shù)支持。首先,我們通過(guò)2-DE結(jié)合MS/MS技術(shù)比較了轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米與其非轉(zhuǎn)基因?qū)φ杖~片的蛋白質(zhì)組,獲得了轉(zhuǎn)植酸酶玉米葉片的總蛋白2-DE圖譜,鑒定了 57個(gè)差異蛋白點(diǎn),占檢測(cè)到的所有蛋白點(diǎn)總數(shù)量的6.7%。這些差異蛋白點(diǎn)均由玉米籽粒自然合成的,沒(méi)有發(fā)現(xiàn)有毒蛋白或過(guò)... 

【文章來(lái)源】：海南大學(xué)海南省 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 轉(zhuǎn)基因作物的安全性評(píng)價(jià)技術(shù)
        1.1.1 轉(zhuǎn)基因作物檢測(cè)技術(shù)
            1.1.1.1 特定DNA的PCR擴(kuò)增技術(shù)
            1.1.1.2 外源蛋白檢測(cè)技術(shù)
            1.1.1.3 其它檢測(cè)技術(shù)
        1.1.2 轉(zhuǎn)基因作物的安全性評(píng)價(jià)
            1.1.2.1 目標(biāo)分析法對(duì)轉(zhuǎn)基因作物可預(yù)期影響的安全性評(píng)價(jià)
            1.1.2.2 非目標(biāo)分析法對(duì)轉(zhuǎn)基因作物不可預(yù)期影響的安全性評(píng)價(jià)
                1.1.2.2.1 轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)
                1.1.2.2.2 代謝組學(xué)技術(shù)
                1.1.2.2.3 蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)
    1.2 組學(xué)技術(shù)在轉(zhuǎn)基因玉米非預(yù)期影響研究中的應(yīng)用
        1.2.1 轉(zhuǎn)錄組學(xué)在轉(zhuǎn)基因玉米非預(yù)期影響的研究
        1.2.2 代謝組學(xué)在轉(zhuǎn)基因玉米非預(yù)期影響的研究
        1.2.3 蛋白質(zhì)組學(xué)在轉(zhuǎn)基因玉米非預(yù)期影響的研究
    1.3 轉(zhuǎn)植酸酶玉米安全性評(píng)價(jià)研究進(jìn)展
        1.3.1 轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米轉(zhuǎn)化事件和目標(biāo)蛋白的檢測(cè)
        1.3.2 轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米營(yíng)養(yǎng)學(xué)評(píng)價(jià)
        1.3.3 轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米食用安全性評(píng)價(jià)
        1.3.4 轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米環(huán)境安全評(píng)價(jià)
    1.4 研究目的及意義
2 材料與方法
    2.1 植物材料
    2.2 主要試劑和儀器
    2.3 植物種植、生長(zhǎng)條件
        2.3.1 光照培養(yǎng)箱中玉米幼苗生長(zhǎng)條件
        2.3.2 大棚玉米種植條件
        2.3.3 田間玉米種植生長(zhǎng)條件
    2.4 轉(zhuǎn)基因玉米轉(zhuǎn)化事件的分子鑒定和外源蛋白的鑒定
        2.4.1 轉(zhuǎn)基因玉米轉(zhuǎn)化事件的分子鑒定
        2.4.2 轉(zhuǎn)基因玉米外源蛋白的鑒定
    2.5 玉米葉片和種子蛋白雙向電泳
        2.5.1 玉米葉片和種子的蛋白提取及其濃度測(cè)定
        2.5.2 玉米葉片和種子的蛋白2-DE
        2.5.3 差異蛋白的MALDI-TOF-TOF質(zhì)譜鑒定
    2.6 iTRAQ技術(shù)用于分析轉(zhuǎn)基因玉米種子的差異蛋白
        2.6.1 iTRAQ標(biāo)記、分級(jí)
        2.6.2 納升級(jí)反相色譜-質(zhì)譜進(jìn)行蛋白質(zhì)分析（nano RPLC）
        2.6.3 iTRAQ數(shù)據(jù)蛋白鑒定和定量分析
    2.7 差異蛋白功能分類(lèi)和生物信息學(xué)分析
    2.8 qRT-PCR分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 外源基因及目標(biāo)蛋白的檢測(cè)
        3.1.1 外源基因的檢測(cè)
        3.1.2 目標(biāo)蛋白的檢測(cè)
    3.2 轉(zhuǎn)植酸酶玉米及其對(duì)照葉片的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究
        3.2.1 轉(zhuǎn)植酸酶玉米及其對(duì)照葉片的2-DE蛋白質(zhì)圖譜比較
        3.2.2 轉(zhuǎn)植酸酶玉米及其對(duì)照葉片的差異蛋白的鑒定
        3.2.3 轉(zhuǎn)植酸酶玉米及其對(duì)照葉片的差異蛋白的生物信息學(xué)分析
        3.2.4 葉片的差異蛋白的蛋白水平和轉(zhuǎn)錄水平模式分析
    3.3 大棚條件下轉(zhuǎn)植酸酶玉米及其對(duì)照種子的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究
        3.3.1 轉(zhuǎn)植酸酶玉米及其對(duì)照種子的2-DE蛋白質(zhì)圖譜比較
        3.3.2 轉(zhuǎn)植酸酶玉米及其對(duì)照種子的2-DE差異蛋白的鑒定
        3.3.3 利用iTRAQ技術(shù)鑒定轉(zhuǎn)植酸酶玉米及其對(duì)照種子的差異蛋白
        3.3.4 2-DE和iTRAQ鑒定的種子差異蛋白的生物信息學(xué)分析
        3.3.5 定量RT-PCR技術(shù)研究種子差異蛋白的基因表達(dá)模式
    3.4 田間種植的轉(zhuǎn)植酸酶玉米及其對(duì)照種子的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究
        3.4.1 轉(zhuǎn)植酸酶玉米及其對(duì)照種子的2-DE蛋白質(zhì)圖譜比較
        3.4.2 轉(zhuǎn)植酸酶玉米及其對(duì)照種子的2-DE差異蛋白的鑒定
        3.4.3 差異蛋白的生物信息學(xué)分析
    3.5 環(huán)境對(duì)轉(zhuǎn)植酸酶玉米蛋白質(zhì)組學(xué)的影響研究
4 討論
    4.1 研究方法對(duì)差異蛋白的鑒定的影響
    4.2 轉(zhuǎn)植酸酶玉米與其對(duì)照之間存在蛋白差異但并未有大規(guī)模實(shí)質(zhì)性改變
    4.3 轉(zhuǎn)植酸酶玉米與其對(duì)照葉片差異蛋白主要是參與碳固定途徑的蛋白
    4.4 轉(zhuǎn)植酸酶玉米與其對(duì)照種子差異蛋白主要為參與轉(zhuǎn)錄后調(diào)控與轉(zhuǎn)錄后修飾的蛋白
        4.4.1 大棚種植的轉(zhuǎn)植酸酶玉米與其對(duì)照種子的差異蛋白
        4.4.2 田間種植的轉(zhuǎn)植酸酶玉米與其對(duì)照種子的差異蛋白
    4.5 環(huán)境對(duì)蛋白質(zhì)組學(xué)的影響
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附圖
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文、申請(qǐng)專利和獲獎(jiǎng)情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米種植對(duì)土壤線蟲(chóng)群落的影響[J]. 郭維維,趙宗潮,蘇營(yíng),牟文雅,劉滿強(qiáng),陳小云,陳法軍.  應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào). 2014(04)
[3]轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米對(duì)田間主要害蟲(chóng)和天敵種群動(dòng)態(tài)的影響[J]. 李凡,孫紅煒,楊淑珂,趙維,郭穎慧,路興波.  中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào). 2013(36)
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[9]轉(zhuǎn)基因植物非預(yù)期效應(yīng)檢測(cè)評(píng)價(jià)技術(shù)的發(fā)展[J]. 趙潔,劉峙,彭于發(fā),齊放軍.  中國(guó)農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào). 2013(02)
[10]轉(zhuǎn)植酸酶玉米生育期及秸稈還田期根際微生物數(shù)量和細(xì)菌菌群多樣性[J]. 張林森,楊正友,孫紅煒,李凡,楊淑珂,段麗君,路興波.  山東農(nóng)業(yè)科學(xué). 2013(03)



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