小麥（Triticum aestivum L.）是我國(guó)重要的糧食作物,對(duì)糧食安全和經(jīng)濟(jì)發(fā)展具有重要的作用。本研究以冬性小麥京841為材料,以從前期轉(zhuǎn)錄組Illumina高通量測(cè)序結(jié)果中篩選出的2個(gè)抗逆相關(guān)基因Tapp2c01和Tamyb01為目的基因,克隆并系統(tǒng)分析了在逆境脅迫過程中兩個(gè)基因的表達(dá)特性,利用病毒誘導(dǎo)的基因沉默技術(shù)和構(gòu)建過表達(dá)載體并進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化驗(yàn)證基因功能。主要研究結(jié)果如下:1.Tapp2c01基因的的編碼框?yàn)?60bp,編碼320個(gè)氨基酸,編碼蛋白預(yù)測(cè)的分子量為34.7KD,等電點(diǎn)PI為8.41;有4個(gè)外顯子和3個(gè)內(nèi)含子;保守結(jié)構(gòu)域分析顯示:Tapp2c01基因第82-317位氨基酸有一個(gè)PP2C結(jié)構(gòu)域,屬于PP2C家族;不同物種PP2C蛋白同源序列比對(duì)結(jié)果表明,Tapp2c01編碼的氨基酸與烏拉圖小麥、山羊草的PP2C蛋白親緣關(guān)系最近,其次是秈稻;和菠蘿、葡萄等的PP2C蛋白親緣關(guān)系相對(duì)較遠(yuǎn)。2.熒光定量結(jié)果表明:干旱脅迫處理（20%PEG6000）下,Tapp2c01基因呈正調(diào)控表達(dá)。在根尖組織中,小麥Tapp2c01基因的表達(dá)量呈先增加在減少后增加的趨勢(shì)。在脅迫處... 

【文章來源】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)河南省

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

類蛋白磷酸酶的結(jié)構(gòu)分析

方法料選用普通小麥（Triticum aestivum L.）品種為京 841（J841），由河技術(shù)研究中心繁殖提供。株與質(zhì)粒載體所用大腸桿菌菌株（Escherichia coli）為 DH5α，根癌農(nóng)桿菌菌株（ALBA4404，克隆載體為 pMD19-T，均購(gòu)自于大連寶生物（Takara體為 pCAMBIA1304 載體（圖 2），由本實(shí)驗(yàn)室保存擴(kuò)繁。病毒載體SMV-γ，由河南科技大學(xué)馬超博士饋贈(zèng)。（兩圖 2）

圖 3-ARNA 電泳檢測(cè) 圖 3-B -actin 基因檢測(cè)反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物.3-A the electrophoresis detection of RNA Fig.3-B Reverse transcription product detectio2 Tapp2c01 基因的克隆及表達(dá)特性分析2.1 Tapp2c01 基因的克隆及序列分析以京 841 葉片提取的 RNA 反轉(zhuǎn)錄的 cDNA 為模板，以 Tapp2c01-F1 和 Tapp2c01-R，PCR 擴(kuò)增得到產(chǎn)物大小為 1141bp 左右，與預(yù)期產(chǎn)物大小一致（圖 4-A）。將用 DNA 凝膠回收試劑盒進(jìn)行回收。連接至 pMD19-T 載體后轉(zhuǎn)化至大腸桿菌 DH正確的陽(yáng)性克隆（圖 4-B）送至北京華大基因公司測(cè)序，作進(jìn)一步的序列分析。


本文編號(hào)：3087915