茶樹(shù)內(nèi)生草螺菌WTOOC（Herbaspirillum sp.WT00C）是本實(shí)驗(yàn)室從野生茶樹(shù)中分離獲得一株茶樹(shù)特異性?xún)?nèi)生革蘭氏陰性細(xì)菌。它的微生物學(xué)性質(zhì)、生理生化性質(zhì)、分類(lèi)鑒定以及茶樹(shù)促生作用都進(jìn)行過(guò)較深入的研究,其基因組也已解序。基因組分析發(fā)現(xiàn)該內(nèi)生菌擁有完整的硒代謝途徑。為了證實(shí)茶樹(shù)內(nèi)生草螺菌WT00C的硒酸鹽還原能力和探索是否可利用該細(xì)菌促進(jìn)茶葉富硒,本項(xiàng)目就草螺菌WT00C的硒酸鹽還原、硒還原的最佳條件、還原硒產(chǎn)物的性質(zhì)以及改善茶樹(shù)硒富集等方面展開(kāi)研究。經(jīng)過(guò)三年的努力,獲得如下主要結(jié)論:1.茶樹(shù)內(nèi)生草螺菌WT00C具有較強(qiáng)的硒酸鹽耐受性。當(dāng)草螺菌WT00C在含硒酸鈉的LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí),細(xì)菌生長(zhǎng)表現(xiàn)抑制現(xiàn)象且抑制作用隨著硒酸鹽濃度的升高而增強(qiáng)。當(dāng)培養(yǎng)基中的硒酸鹽濃度達(dá)到200 mM時(shí),12小時(shí)培養(yǎng)期間內(nèi)細(xì)菌生長(zhǎng)受到嚴(yán)重抑制,但12小時(shí)后細(xì)菌細(xì)胞恢復(fù)生長(zhǎng)并且在48小時(shí)時(shí)接近不含硒酸鹽對(duì)照組的細(xì)菌生長(zhǎng)水平。活菌檢測(cè)發(fā)現(xiàn)12小時(shí)培養(yǎng)期間內(nèi)的細(xì)菌仍然存活,表現(xiàn)出較強(qiáng)的硒酸鹽耐受性。通過(guò)條件優(yōu)化發(fā)現(xiàn),在溫度為37℃和轉(zhuǎn)速為200rpm條件下,草螺菌WT00C還原硒酸鈉最佳。2.茶樹(shù)內(nèi)生... 

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我國(guó)各地土壤硒含量Cmglkg)Dz}Figurel.2Soilselenium‘lioninChina(mg/kg)

于含１００?ｍＭ硒酸鈉的ＬＢ液體培養(yǎng)基中。以２００?ｒｐｍ的轉(zhuǎn)速３７°Ｃ恒溫培養(yǎng)２４小０ｔ。??將菌液轉(zhuǎn)移至離心管中，以１００?ｘｇ轉(zhuǎn)速離心１０分鐘，收集上清。６０８０?ｘｇ轉(zhuǎn)速離心１〇??分鐘，收集沉淀，用無(wú)菌的１?ＭＰＢＳ緩沖液重懸沉淀。按圖２．１所示方法，用無(wú)菌的５０％??和７０％蔗糖溶液（各２?ｍＬ），在無(wú)菌的離心管中制得密度梯度。將ｌｍＬ重懸液轉(zhuǎn)移至??蔗糖溶液上層，１５０００?ｘｇ離心２０分鐘。小心吸�。担埃フ崽呛停罚埃フ崽侨芤褐虚g的紅色??區(qū)帶，用無(wú)菌的１ＭＰＢＳ緩沖液重懸沉淀。轉(zhuǎn)移至新的蔗糖密度梯度溶液上，再離心一??次。用無(wú)菌的１?ＭＰＢＳ緩沖液清洗沉淀，６０８０?ｘｇ離心１〇分鐘收集沉淀，重復(fù)兩次。得??到純化后的硒納米顆粒懸液。??２５??

培養(yǎng)草螺菌ＷＴＯＯＣ培養(yǎng)基的紅色最深，草螺菌Ｏｓ３４次之，大腸桿菌ＢＬ２１紅??色最淺。說(shuō)明草螺菌ＷＴＯＯＣ比草螺菌Ｏｓ３４和大腸桿菌ＢＬ２１能更有效地還原硒酸鹽（參??見(jiàn)圖２．３）。??３１??

【參考文獻(xiàn)】：
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