【摘要】：三種藥用植物沉香、降香、鉤藤均具有較多藥理活性和較高的藥用價(jià)值,但存在以假亂真、以次充好及近緣物種難以區(qū)分等現(xiàn)象。DNA條形碼技術(shù)經(jīng)過10多年的發(fā)展與應(yīng)用,被廣泛用于藥用植物的物種分類與鑒定,可以彌補(bǔ)傳統(tǒng)鑒定方法的不足。本文以這三種藥用植物所在屬(沉香屬、黃檀屬、鉤藤屬)的屬內(nèi)物種為研究對(duì)象,基于多條通用條形碼(ITS、mat K、rbcL、psbA-trnH和trnL-trnF)序列,對(duì)DNA條形碼技術(shù)在藥用植物中的可行性進(jìn)行驗(yàn)證,同時(shí)探討這三種藥用植物的屬內(nèi)系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系,為它們的鑒定與分類提供理論依據(jù)。得出以下結(jié)論:(1)沉香屬系統(tǒng)發(fā)育分析:使用6個(gè)DNA條形碼(ITS、matK、rbcL、psb A-trnH、trn L-trn F和ITS+trnL-trnF)對(duì)沉香屬及擬沉香屬23個(gè)物種共608條序列進(jìn)行分析,結(jié)果表明組合條形碼ITS+trnL-trnF序列具有較多變異位點(diǎn)、較大的種內(nèi)種間距離和較高的物種鑒別率,且系統(tǒng)發(fā)育樹中具有較好的分辨能力,但仍較難清晰區(qū)分Aquilaria crassna和Aquilaria subintegra這2個(gè)近緣物種。(2)黃檀屬系統(tǒng)發(fā)育分析:本實(shí)驗(yàn)先對(duì)3個(gè)降香黃檀(Dalbergia odorifera)樣品進(jìn)行DNA提取、純化及PCR擴(kuò)增,進(jìn)而對(duì)GenBank中已有的黃檀屬序列進(jìn)行序列特征分析和系統(tǒng)發(fā)育學(xué)分析,實(shí)驗(yàn)的相關(guān)結(jié)果表明改良CTAB法可用于降香黃檀的DNA提取,組合條形碼ITS+mat K+rbcL具有比較好的物種鑒定能力,能較好地反映黃檀屬物種之間的差異,因此建議使用該組合條形碼作為鑒定黃檀屬植物的DNA條形碼。(3)鉤藤屬系統(tǒng)發(fā)育分析:基于《中國(guó)植物志》中記錄的12個(gè)鉤藤物種共132條ITS序列進(jìn)行分析,結(jié)果表明ITS序列比ITS2序列擁有更多變異位點(diǎn);在系統(tǒng)發(fā)育樹中,ITS序列闡明了大部分鉤藤屬物種的親緣關(guān)系;ITS2二級(jí)結(jié)構(gòu)可作為區(qū)分云南鉤藤Uncaria yunnanensis和恒春鉤藤Uncaria lanosa的候選方法。
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S567
【圖文】：

廣東藥科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文R 擴(kuò)增良 CTAB 法進(jìn)行提取后，用 1%瓊脂糖凝，電泳結(jié)果見圖 2-1，可見總 DNA 主條帶純化后再使用各引物進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，各樣，部分沉香樣品 PCR 擴(kuò)增結(jié)果見圖 2-2，可序結(jié)果表明，由于 trnL-trnF 序列含有大于，高頻率的單核苷酸重復(fù)干擾相關(guān)酶的功接后手動(dòng)校正，其余 4 個(gè)條形碼序列的測(cè)

圖 2-2 部分沉香樣品 PCR 電泳圖Figure 2-2 Electrophoresis result of different barcodes of partial Aquilaria samples注：M：Marker DL 2000；1-3：ML-10 ~ ML-122.3.2 序列特征本實(shí)驗(yàn)總共 350 條序列，部分序列已提交至 NCBI GenBank 數(shù)據(jù)庫(kù)，登錄號(hào)為KY817942 - KY817985，KY927165 - KY927340。從 GenBank 數(shù)據(jù)庫(kù)獲取 272 條序列，匯總實(shí)驗(yàn)得到的序列后總共 622 條序列，涵蓋 16 個(gè)沉香屬物種、7 個(gè)擬沉香屬物種及 3 個(gè)外類群物種（附表 1）。其中 ITS 的序列數(shù)及變異位點(diǎn)最多，種內(nèi)、種間距離最高；trnL-trnF 序列所占物種數(shù)最多，變異位點(diǎn)、種內(nèi)種間距離均比 ITS 序列低，但均比 matK、psbA-trnH 和 rbcL 序列高（表 2-3）。由于 trnL-trnF 序列在瑞香科植物中的進(jìn)化速率較快[84]，且基于物種數(shù)、變異位點(diǎn)數(shù)量及遺傳距離等方面的考慮，本實(shí)驗(yàn)決定串聯(lián)拼接 ITS 及 trnL-trnF 序列為一條組合條形碼，結(jié)果表明 ITS +trnL-trnF 能提供較多變異位點(diǎn)且種內(nèi)、種間距離較大。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2729044